抗眼肌抗體EMAb的檢測方法

    抗眼肌抗體（eyemuscleantilody,，EMAb）為一類能與眼肌細(xì)胞膜及可溶性抗原結(jié)合的自身抗體。楊清萍等（1998）在提取牛眼肌膜抗原的基礎(chǔ)上,，建立了檢測EMAb的免疫印跡（WB）法,，對自身免疫性甲狀腺疾病及SLE患者進(jìn)行了檢測。現(xiàn)介紹WB法檢測EMAB,。

    1．操作步驟  將所提取的眼肌膜抗原多肽轉(zhuǎn)印于硝酸纖維膜（NC膜,，孔徑0．3um）上，將NC膜置5％脫脂奶粉溶液內(nèi)封閉過夜,；含0．3％Tween 20,，pH7．4的PBS洗滌,；干后切條,，4~C保存?zhèn)溆谩Ｗ?/span>WB法時,，將抗原膜條置反應(yīng)槽中,，加0．1mL兔血清，含0．3％Tween 20,，pH7．4的0．01moL／LPBS 0．9mL和待測血清20~zL,，37~C孵育45min，洗滌,，每槽加辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗人IgC lmL,，37~C孵育45min，洗滌,，加DAB底物液lmL,，37~C20rain，加2mol／LH2S040．5mL終止反應(yīng)2min后,，流水沖洗,，讀取結(jié)果。

    2．臨床意義  有突眼征和無突眼征的Graves病患者血清中EMAb檢出率較高,，但抗體陽性亦見于部分無甲狀腺功能異常的突眼征患者,，橋本甲狀腺炎,，SLE等患者中。SLE患者血清中存在的EMAb與自身免疫性甲狀腺疾病患者的EMAb有所不同,，主要針對42kD和35kD多肽,，這種異質(zhì)性抗體與抗核抗體無關(guān)，不能被ENA吸收,，其存在意義尚不清楚,，可能是SLE患者自身免疫反應(yīng)的一種表現(xiàn)。

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