抗心磷脂抗體ACA的檢測方法

    抗磷脂抗體是一組針對各種帶負電荷磷脂的自身抗體,，包括抗心磷脂抗體（anticardi-

olipinantibody，ACA）,、抗磷脂酰絲氨酸,、抗磷脂酰胺醇、抗磷脂酰甘油,、抗磷脂酸抗體等,。國內(nèi)一些單位對SLE、習慣性流產(chǎn),、神經(jīng)系統(tǒng)疾病,、急慢性白血病、腎臟疾病,、消化系統(tǒng)疾病等研究發(fā)現(xiàn),，ACA與這些疾病的凝血系統(tǒng)改變、血栓形成,、血小板減少等密切相關,，并與疾病的發(fā)生機理也有關聯(lián)。ACA較其他四種負電荷性磷脂抗體陽性率高,，且敏感,，故ACA檢測日益受到重視。已建立了RIA和ELISA等方法,。國內(nèi)已有商品化的ELISA法檢測ACA試劑盒問世，可以作為常規(guī)檢查,。

    1,。試劑  ①純心磷脂：可購買商品心磷脂（cardiolipin,，CL）；②辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗人IgC．,、IgM,、IgA。

    2,，操作步驟  將純心磷脂用無水乙醇配成12．5／／g／mL,，加入干燥潔凈的聚苯乙烯反應板，50~L／孔,，置氮氣下室溫蒸發(fā)干燥,。次日以PBS-T洗板3次后，以0．3％明膠封閉,，150gL／孔,，置37T1 90rmn，洗板3次,。加1：1 000稀釋的待測血清或陽性和陰性對照血清（稀釋液為0．01mol／L,，PBS-T，pH7．4,，含4％PEG）,，lOOgL／孔，置37~C濕盒反應2ho洗板5次后,，加HRP-羊抗人ISC或Igm,、IZA（以含1％BSA的PBS-T-PEG稀釋成1：800）100~L／孔，置37~C濕盒反應1h,。洗板5次后甩干,，加新鮮配制的底物液i00／~L／孔（10ngOPD溶于25mL，0．1mol／L,，pH5．0的檸檬酸緩沖液,，加3％H20：20／~L），37％反應10～15min,，待充分顯色后每孔滴加2mol／LU2S04 50gL終止反應,，測各孔492nm吸光度（A）。

    3．結(jié)果判定與臨床意義  標本及陽性,、陰性對照均采用雙孔測定,，取2孔A值的平均值以P／N~>2．1判為陽性。

在腦血栓患者中,，IsC型ACA陽性率zui高并與臨床密切相關,。約70％未經(jīng)治療的ACA陽性患者可發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)和宮內(nèi)死胎，尤其是IzM型ACA可作為自發(fā)性流（死）產(chǎn)的前瞻性指標,。已證實ACA陽性者血小板減少發(fā)生率均明顯高于陰性者,，以IgC型抗體多見,，并與血小板減少程度有關。ACA也是SLE常見的自身抗體,，在SLE患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）血栓形成與陽性ACA顯著相關,。總之,，ACA可作為抗磷脂抗體綜合征（包括血栓形成,、自發(fā)性流產(chǎn)、血小板減少和CNS病變）的診斷指標之一,。

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