肝特異性脂蛋白LSP的檢測方法

    肝特異性脂蛋白（1iverspecificlipoprotein,，LSP）為一種大分子的脂質(zhì)相關(guān)復(fù)合物，含有大量肝細(xì)胞漿膜抗原,，其中大部分是器官非特異性的,，部分是肝特異性的。LSP抗原還存在種屬非特異性的抗原決定簇,。LSP的種屬非特異性在人,、兔之間，器官特異性在肝,、腎之間更為接近,。

    因此在制備LSP抗原時，可用兔肝代替人肝,；但在檢測抗LSP抗體時,，應(yīng)考慮到腎病的相互干擾。由于LSP可能是活體內(nèi)免疫病理反應(yīng)的靶抗原,，抗LSP可以通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADCC）途徑殺傷自身肝細(xì)胞,，并認(rèn)為此可能是導(dǎo)致體內(nèi)肝細(xì)胞持續(xù)性損傷的主要因素。因此,，近年來研究較多的是抗LSP的各種Ig類別,。抗LSP抗體的檢測有放射免疫沉淀法,、放射免疫自顯影法以及ELISA法等?，F(xiàn)介紹ELISA法。

    1．試劑  ①LSP抗原：將新鮮正常人肝或兔肝除去包膜,，剪成小塊,，用自來水，生理鹽水洗去血液,，直到肝組織顏色發(fā)白,。稱重，加等量（W／V）0．25mol／L蔗糖（EDTA-Tris緩沖液1 000mL,，含蔗糖85．6g）溶液,，于高速組織搗碎機(jī)中勻漿5min，3 000r／rain離心30min,，除去沉淀,。上清加硫酸銨使達(dá)50％飽和度,，4cC靜置1h后，3000r／min離心20rain,，棄上清,。沉淀溶于EDTA-Tris緩沖液，過SephadexC—100凝膠柱,，用同一緩沖液洗脫,，收集*蛋白峰。加硫酸銨使達(dá)50％飽和度,，4cC靜置1h,，3000r／min離心20min，收集沉淀溶于ED-TA-Tris緩沖液中,，再過Sepharose 6B柱,，同一緩沖液洗脫，收集*蛋白峰,，即為LSP,；②酶結(jié)合物：HRP標(biāo)記的羊抗人IgG、IgA,、IgMF（ab’）：段,。

    2．操作步驟  在聚苯乙烯板孔中加入0．15mLLSP溶液（25ug／mL），置37℃!h后,，4~C過夜,，洗3次，每次3min（以下同）,；每孔加1：50稀釋的待檢血清0．1mL，置37~C1h,，洗3次,；加zui適工作濃度的抗人IsC（或抗IzA、IgM）酶結(jié)合物0．1mL,，37~C1h,，洗3次；加底物溶液,，37％20min顯色后,，用2mol／LH2S04終止反應(yīng)。于酶標(biāo)儀492nm波長測吸光度值,。每板均設(shè)陽性,、陰性對。

    3．結(jié)果觀察  P／N值≥1．1為陽性,。P／N值計算法如下：

P/N=P/（Xn+2S）

    P為待測血清吸光度值,，Xn為50—100例正常對照血清的吸光度均值,。

    4．臨床意義  抗LSP-IgG的檢測也與肝炎病型的輕重有關(guān)，且滴度隨病情變化而波動,；進(jìn)行動態(tài)觀察,，可以估計病情變化?？?/span>LSP-IgM主要見于重癥肝炎和急性肝炎,，出現(xiàn)早，續(xù)時間短,，似可做為肝細(xì)胞損傷的早期指標(biāo),。抗LSP-IgA可能主要出現(xiàn)于自身免疫反應(yīng)持續(xù)時間較長的病例,，對于區(qū)別急性肝炎和慢性肝炎急性波動有一定的意義,。在慢性腎病中，可出現(xiàn)一些交叉反應(yīng),，應(yīng)予鑒別,。 

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