抗線粒體抗體AMA的檢測方法

    抗線粒體抗體（anti-mitochondrialantibody，AMA）是一種非器官特異性,、非種屬特異性的自身抗體,。線粒體存在于全身各組織的細胞中,，但以遠曲腎小管zui為豐富,，故檢查AMA所用的抗原基質(zhì)多選用腎髓質(zhì)。AMA檢測目前仍主要用IFA,，但近來也有采用RIA,、ELISA和斑點免疫法等方法。下面以間接免疫熒光法為例檢測AMA,。

    1．腎組織冰凍切片  將大鼠處死,，剖腹取腎，在腎中部成楔形切下腎組織,，立即冰凍,。用冷凍切片機切成4—6um，貼于清潔玻片上,，迅速用電風扇吹干,，不固定。密封后置—20℃冰箱中保存,。

    2．操作步驟

    （1）將待測血清用0．01mol／L,，pH7．4PBSl：10稀釋后滴加于底物片上，室溫,、濕盒反應(yīng)30min,。用PBS沖洗后再浸洗3次，分別為5min,、5min、10rain（以下同）,，吹干,。每批試驗設(shè)陽性、陰性對照,。

    （2）滴加zui適濃度熒光抗體,，室溫、濕盒反應(yīng)30min,。同上法充分洗滌,，吹干。

    （3）用無自發(fā)熒光的緩沖甘油封片,，熒光顯微鏡檢查,。AMA的特異熒光出現(xiàn)于富含線粒體的遠曲腎小管上皮細胞的胞漿中。

    3．注意事項  ①線粒體的穩(wěn)定性差,，極易自然破壞,。因此,，在制作切片時應(yīng)注意將組織標本速凍，不能反復凍融,，切片后要快速吹干,，以防線粒體破壞；②切片保存是關(guān)鍵,，放—20~C冰箱一定要防潮,，從冰箱取出（特別是夏天）要注意防止水汽凝結(jié)，造成切片潮濕而破壞線粒體,。取出切片后應(yīng)立即放電風扇下吹干10min,。

    4．臨床意義  原發(fā)性膽汁性肝硬化患者AMA陽性率可達90％以上，且抗體滴度甚高,，半數(shù)以上病人可達1：200—1：6 000,。膽總管阻塞性肝硬化、繼發(fā)性膽汁性肝硬化患者,，抗線粒體抗體皆為陰性,。阻塞性肝硬化患者陽性率在3％以下，而慢性活動性肝炎陽性率為90％,。正常人陽性率低于1％,。據(jù)此，抗線粒體抗體的檢查可作為原發(fā)性膽汁性肝硬化和肝外膽道阻塞性肝硬化癥的鑒別診斷,。另外,，由于在慢性活動性肝炎時此抗體陽性率亦較高，故對鑒別診斷肝炎也有參考價值,。

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