抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）檢測

    男性體內(nèi)的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當(dāng)此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時,，精子或其可溶性抗原逸出，可導(dǎo)致機體產(chǎn)生自身抗精子抗體（antispermatozoa antibody,，ASA）,，從而抑制精子產(chǎn)生，造成男性不育,。女性生殖道具有酶系統(tǒng),，能降解進(jìn)入的精子抗原，使其不能達(dá)免疫系統(tǒng),。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產(chǎn)生,。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。

    測定ASA的方法很多,，目前常用的有熒光抗體法,，淺盤微量凝集法，伊紅Y染色法,，試管或玻片凝集法,，固相酶染色法，免疫珠法,，免疫洗選法（panning法）及ELISA法等,。這些方法各有利弊，都不能*臨床快速診斷的要求。莊南等（1991）在ELISA反應(yīng)系統(tǒng)中,，加入適量的PEG,，可使每步反應(yīng)時間在10min內(nèi)完成，同時用DW-T快速沖洗代替常規(guī)的PBS-T洗滌方法,，從而能在40rain內(nèi)完成檢驗,。且該法有較高特異性和精密度，適用于常規(guī)工作?，F(xiàn)介紹快速ELISA法檢測抗精子抗體,。

    1．試劑  ①人精子膜抗原：取20份正常生育男性的精液，液化后,，用PBS洗5次,，沉淀的精子混懸于含0．5％NP-40（FLUKA）的Tris-HCl緩沖液中，4℃1h,，17 000Xg離心30min,，取上清液測定蛋白量，即為精子膜抗原,；②HRP標(biāo)記的羊抗人丁球蛋白,；③4％和8％PEG-PBST緩沖液：0．01mol／L，pH7．4PB加入NaCl達(dá)0．85％,，Tween-20為0．05％及PEG6000為4％或8％。

    2．操作步驟  將精子膜抗原用包被液按1：100稀釋,，包被反應(yīng)板微孔,，每孔100uL，4℃過夜,，用含0．05％Tween-20的蒸餾水（DW-T）洗3次,，每孔加待測血清50uL，同時設(shè)性,、陽性和空白對照孔,，43℃10rain，DW-T洗3次后,，加zui適工作濃度的HBP標(biāo)記的抗人γ球蛋白（用含0％小牛血清的4％PEG-PBST作1：1 000稀釋）,，每孔100uL，43℃10min,；DW—T洗3次,，加底物（OPD-H₂0₂）溶液，每孔100yL,，37％10min使呈色,，用2mol／LH2S04 50gL終止反應(yīng)，測492nm波長吸光度值（A），以P／N≥2．1為陽性,。

  3．臨床意義  ASA的檢出率因采用的檢測方法不同,，結(jié)果也不一致。通常不育者血清中ASA檢出率在10％—30％左右,。尤其是梗阻性無精癥病人,，ASA陽性率可高達(dá)60％。ASA的出現(xiàn)以及滴度升高是造成免疫性不育,、不孕的根本原因,，因而ASA的檢測對不育的臨床治療和預(yù)后的判斷提供了有價值的指標(biāo)。

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