抗子宮內(nèi)膜抗體（endomethal antibody，EMAb）檢測(cè)

    子宮內(nèi)膜抗體（endomethal antibody,，EMAb）是子宮內(nèi)膜異位病患者受到異位內(nèi)膜的刺激,，或經(jīng)血逆流等因素導(dǎo)致免疫應(yīng)答紊亂產(chǎn)生的一種自身抗體，并與子宮內(nèi)膜中靶抗原結(jié)合,，在補(bǔ)體參與下,，引起子宮內(nèi)膜免疫病理?yè)p傷，影響孕卵著床,，也容易發(fā)生早期流產(chǎn)。目前檢測(cè)EMAb的方法有間接免疫熒光法（1FT）,、雙向免疫擴(kuò)散法（1D）,、間接血凝法（PHA）及ELISA法等。IFF法需刮取子宮內(nèi)膜制備抗原片,，并需一定設(shè)備,，不易普及開(kāi)展，ID及PHA法的靈敏度與特異性均不高,，現(xiàn)介紹間接ELISA法,。

    1．試劑  ①子宮內(nèi)膜抗原：從子宮切除術(shù)取得的子宮內(nèi)剖取內(nèi)膜,，用無(wú)菌生理鹽水洗去血塊，剪成lmm3小塊,，懸入0．01mol／L,，pH7．4PBS中（內(nèi)含青霉素1 000U／mL，慶大霉素50ug／mL,，鏈霉素100ug／mL,，10％小牛血清）與0．25％膠原酶（collagenase Type 1）共育，通過(guò)250um,40um不銹鋼分樣篩,，洗去膠原酶,，收集篩網(wǎng)上子宮內(nèi)膜腺體，經(jīng)玻璃勻漿器勻漿后,，1 000r／min離心20rain,，棄沉淀，上清通過(guò)抗人全血清-Sepharose 4B柱,，收集流洗液,。濃縮后，雙向免疫擴(kuò)散與抗人全血清,、抗人纖維蛋白原抗體之間應(yīng)無(wú)沉淀線(xiàn),，作為包被抗原；②HRP標(biāo)記的SPA結(jié)合物,，用方陣法滴定zui適工作濃度,。

    2．操作步驟  在聚苯乙烯反應(yīng)板每孔加100uL子宮內(nèi)膜抗原（1：100），4T：,，包被過(guò)夜,，常法洗滌。用含15％小牛血清的pH7．40．01mol／LPBS封閉,，45℃溫育1h,，洗滌后加1：2稀釋的待測(cè)血清，45℃1h后洗滌,，加底物（OPD-H₂0₂）溶液,，于37％避光反應(yīng)5～15min，加H₂S0₄終止反應(yīng)后,，測(cè)492nm波長(zhǎng)吸光度（A）值,。以A值的X十2S為正常上限，大于或等于上限者為陽(yáng)性,。

    3．臨床意義  正常婦女由于經(jīng)血逆流人腹腔對(duì)免疫系統(tǒng)的刺激,，血清中有低水平EMAb存在（陽(yáng)性率3％—7％），以中年婦女的陽(yáng)性率zui高，閉經(jīng)后EMAb水平下降,，漸趨消失,。不孕、流產(chǎn)及子宮內(nèi)膜異位癥患者陽(yáng)性率可達(dá)37％～50％,。EMAb,、抗精子抗體和弓形體感染是引起人類(lèi)不孕、流產(chǎn)的3個(gè)主要因素,，聯(lián)合檢測(cè)則更可以提高診斷的準(zhǔn)確性,。

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