人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）ELISA試劑盒使用說明書

                           本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱：

通用名：人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）診斷試劑盒

使用目的：

  本試劑盒用于測定人血清,、血漿、或其它組織液中基質(zhì)金屬蛋白酶-2                            （MMP-2 ）含量。

實(shí)驗原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人基質(zhì)金屬蛋白酶2  （MMP-2）水平。用純化的

人基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次

加入人基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）,，再與HRP 標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白酶2                 （MMP-2）抗體

結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB  顯色,。TMB  在HRP

酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人基質(zhì)

金屬蛋白酶2（MMP-2）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過

標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2 （MMP-2）濃度,。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑                6ml×1 瓶        8    標(biāo)準(zhǔn)品（1800 μg/L） 0.5ml×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板               12 孔×8 條       9    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml×1 瓶        10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個

標(biāo)本要求

    1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗,。

    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性,。

    3．可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10 孔,，在*,、第二孔中分別加標(biāo)

    準(zhǔn)品100μl，然后在*,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后從*孔,、第二

    孔中各取100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，

    混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉，再各取50μl 分別加到第五,、第六孔

    中,，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各

    取50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混

    勻后從第七,、第八孔中分別取50μl 加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)

    品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

    濃度分別為（1200 μg/L,，800 μg/L      ,，400 μg/L，200 μg/L,，100 μg/L）。

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣

    品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去,，如此

    重復(fù)5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5,。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。測定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD              值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，

即為樣品的實(shí)際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

   用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值

   大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5．嚴(yán)格按說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)

6．底物請避光保存,。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10.  如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn)。

檢測范圍：

  20μg/L -1500 μg/L

規(guī)格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6 個月

詳情請登入: http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1   http://www.biohj.com

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