日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

| 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

13764356938

technology

首頁   >>   技術(shù)文章   >>   瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程

上海金鵬分析儀器有限公司

立即詢價

您提交后,,專屬客服將第一時間為您服務(wù)

瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程

閱讀:4695      發(fā)布時間:2021-8-26
分享:

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程:

凝膠電泳操作注意事項:

1. 緩沖系統(tǒng):在沒有離子存在時,電導(dǎo)率*小,,DNA不遷移,,或遷移極慢,在高離子強度的緩沖液中,,電導(dǎo)很高并產(chǎn)熱,,可能導(dǎo)致DNA變性,因此應(yīng)注意緩沖液的使用是否正確,。長時間高壓電泳時,,常更新緩沖液或在兩槽間進(jìn)行緩沖液的循環(huán)是可取的。

2. 瓊脂糖:不同廠家,、不同批號的瓊脂糖,,其雜質(zhì)含量不同,影響DNA的遷移及熒光背景的強度,,應(yīng)有選擇地使用,。

3. 凝膠的制備:凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致,溶解的凝膠應(yīng)及時倒入板中,,避免倒入前凝固結(jié)塊,。倒入板中的凝膠應(yīng)避免出現(xiàn)氣泡,影響電泳結(jié)果,。

4. 樣品加入量:一般情況下,,0.5cm寬的梳子可加0.5ug的DNA量,,加樣量的多少依據(jù)加樣孔的大小及DNA中片段的數(shù)量和大小而定,過多的量會造成加樣孔超載,,從而導(dǎo)致拖尾和彌散,,對于較大的DNA此現(xiàn)象更明顯。

5. 電泳系統(tǒng)的變化會影響DNA的遷移,,加入DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物進(jìn)行判定是必要的,。

6. DNA樣品中鹽濃度會影響DNA的遷移率,平行對照樣品應(yīng)使用同樣的緩沖條件以消除這種影響,。

7. DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度,,遷移分子的形狀及大小。采用不同濃度的凝膠有可能分辨范圍廣泛的DNA分子,,制備瓊脂糖凝膠可根據(jù)DNA分子的范圍來決定凝膠的濃度。小片段的DNA電泳應(yīng)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳以提高分辨率,。

 

瓊脂糖加樣時候注意事項:

1,、 用移液搶將樣品加至點樣孔。每孔點樣的體積一般少于25ul,,因此吸取每一個樣品時,,操作要穩(wěn)當(dāng)且細(xì)心。

2,、 常加一定量的蔗糖來增加樣品的濃度,,以使每個樣品停留在各自的點樣孔中。

3,、 在樣品中加入水溶性的陰離子追蹤染料(如溴酚藍(lán)),,用以看出樣品移動的距離。

4,、 在一個或幾個孔中加入標(biāo)準(zhǔn)分子質(zhì)量樣品,,電泳結(jié)束后,根據(jù)已知分子質(zhì)量的帶的相應(yīng)位置可用來做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

5,、 電泳一般是在追蹤染料泳動到膠的80%部位時停止。注意電泳期間,,電泳槽蓋要安全蓋好,,以防止液體蒸發(fā),又可以降低電擊的可能性,。

6,、 電泳結(jié)束后,將膠浸沒在1mg/L的溴化乙錠(EB)中,,5min后即可看到DNA帶,,EB通過插入在雙螺旋的配對核苷酸之間同NDA結(jié)合。另一種方法是電泳時,在膠中加入EB,。

7,、 在紫外燈下,由于EB發(fā)出強烈的橘紅色的熒光,,所以可以看到DNA帶,。利用這種方法檢測的界限是每條帶約10ng DNA。帶上塑料安全眼鏡可防止紫外光對眼睛的傷害,??捎贸咦觼頊y量每條帶至點樣孔的距離。同樣,,利用特制的照相機和調(diào)焦器,,也可以對凝膠拍照。

8,、 如果要對某一條帶(如質(zhì)粒)進(jìn)一步分析,,可用小刀將含該帶的凝膠切割下來,從帶中回收DNA,。

 

瓊脂糖核酸電泳實驗操作流程

1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,,架好梳子,;

2.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi),,定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml),;

3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻,,加入一滴熒光染料,,輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,,待其凝固,;

4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié),小心拔出梳子,,將凝膠安放在電泳槽內(nèi),;

5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,,如樣品孔內(nèi)有氣泡,,應(yīng)設(shè)法除去;

6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),,混勻后,,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi),;

7.接通電源,紅色為正極,,黑色為負(fù)極,,切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動 (靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60~100V電壓,,電泳20~40min即可,;

8. 根據(jù)指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳,;

9.電泳完畢,,關(guān)上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,,并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴增產(chǎn)物的大小,。 

瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的*佳分辨范圍

瓊脂糖凝膠濃度線形DNA的*佳分辨范圍(bp)

0.5%1,000~30,000

0.7%800~12,000

1.0%500~10,000

1.2%400~7,000

1.5%200~3,000

2.0%50~2,000

 

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于瓊脂糖凝膠電泳注意事項及操作流程。

 

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測定儀,、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng),、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀,、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀,、蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng),、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器,、恒流泵,、自動部分收集器等十幾個系列產(chǎn)品的廠家,歡迎大家前來訂購


會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功,!我們將在第一時間回復(fù)您~
在線留言