那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于掌握蛋白純化中親和層析和凝膠層析分離的一般原理和操作方法。

一,、目的要求：

1. 學(xué)習(xí)與掌握親和層析和凝膠層析分離的一般原理和操作方法,。

2. 了解自動化純化設(shè)備基本組成和原理。

3. 了解親和吸附層析瓊脂糖,、凝膠過濾葡聚糖的基本性質(zhì)。掌握組氨酸標(biāo)簽蛋白的基本性質(zhì)和純化原理和操作,；掌握緩沖液置換和脫鹽的原理和操作,。

二、實(shí)驗(yàn)概述（如右圖）

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 樣品預(yù)處理：即通過超聲這種細(xì)胞破碎的手段,，將在大腸桿菌E.coli中表達(dá)的重組的帶6個His標(biāo)簽的綠色熒光蛋白釋放到相應(yīng)的緩沖液當(dāng)中,，再通過離心，0.2微米濾膜過濾等去除細(xì)胞碎片和別的污染物,；

2. 組氨酸標(biāo)簽蛋白親和層析：HisTrapTMHP crude, 1mL預(yù)裝層析柱,，進(jìn)行親和層析，一步就可以達(dá)到90%左右的純度

3. 凝膠過濾層析脫鹽去除咪唑：HiTrapTM  Desalting 5mL預(yù)裝層析柱進(jìn)行脫鹽,，置換緩沖液

4. 電泳：對純化過的樣品的檢測,。

三、設(shè)備以及試劑準(zhǔn)備（試劑均使用化學(xué)純以上）：

1. 儀器：核酸蛋白檢測儀HD系列,、自動部分收集器BSZ\DBS系列,、恒流泵HL系列

2. 樣品：EGFP原液

3. 層析柱：HisTrap HP 1ml, 1根；HiTrap Desalting 5ml,，1根

4. 層析緩沖液

5. 注射器,，燒杯，負(fù)壓脫氣瓶等實(shí)驗(yàn)室常用容器

四,、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1. 儀器和實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

所有緩沖液需要過0.2um膜過濾,，負(fù)壓脫氣抽濾瓶脫氣，脫氣裝置如圖所示

樣品預(yù)處理：即通過超聲這種細(xì)胞破碎的手段,，將在大腸桿菌E.coli中表達(dá)的重組的帶6個His標(biāo)簽的綠色熒光蛋白釋放到相應(yīng)的緩沖液當(dāng)中,，再通過離心,，0.45 微米濾膜過濾等去除細(xì)胞碎片和別的污染物；用注射器吸取大于2ml樣品

將注射器內(nèi)的樣品從樣品環(huán)3號口推入,，注意不要將氣泡推入樣品環(huán)(如右圖),。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于掌握蛋白純化中親和層析和凝膠層析分離的一般原理和操作方法。

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