那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標(biāo)簽如何選擇,。
體外重組蛋白表達技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學(xué)的各個領(lǐng)域。目前,，體外重組蛋白表達系統(tǒng)主要有四類：原核表達系統(tǒng),、哺乳動物細胞表達、酵母表達系統(tǒng)及昆蟲細胞表達,。表達的一般實驗包括載體構(gòu)建-表達鑒定-蛋白純化三大步驟,。在構(gòu)建載體階段，除了一些必要的表達元件,，還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標(biāo)簽的選擇,。選擇合適的標(biāo)簽不但有利于蛋白的純化，促進蛋白的可溶性，同時也不能影響蛋白的結(jié)構(gòu)功能和下游應(yīng)用,。感謝使用上海金鵬蛋白純化系統(tǒng)Blupadstart進行蛋白純化分離實驗,。
本文詳細介紹了幾種蛋白純化標(biāo)簽，幫助我們更好的設(shè)計實驗,。
蛋白純化標(biāo)簽比較
| 融合標(biāo)簽 | 大?。↘D） | 功能 | 是否切除 |
| HIS | 0.84 | 有利純化，能純化可溶性/包涵體蛋白 | 標(biāo)簽小,，對蛋白無影響 |
| GST | 26 | 增強蛋白可溶性,，僅能純化可溶性蛋白，屏蔽毒性蛋白 | 標(biāo)簽較大,，影響較大 |
| MBP | 44.4 | 增強蛋白可溶性,，屏蔽毒性蛋白 | |
| NusA | 55 | 增強蛋白可溶性，屏蔽毒性蛋白 | |
| SUMO | 11.2 | 增強可溶性,，屏蔽毒性蛋白 |
表1：各個標(biāo)簽性能對比表
HIS-Tag蛋白純化的標(biāo)簽
HIS-Tag本身的特性對目的蛋白沒有影響,，不會形成二聚體；
分子量較小,，只有0.84KD,，對蛋白的下游應(yīng)用不會產(chǎn)生影響；
原性低,，可將純化的蛋白直接注射動物進行并制備抗體,；
HIS-Tag與的轉(zhuǎn)錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達,；
可與其他標(biāo)簽構(gòu)建雙標(biāo)簽表達,，可用于多種蛋白表達系統(tǒng)，純化條件溫和對蛋白影響較小,。
GST-Tag（谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽）
GST-Tag相對分子質(zhì)量較大,，約為26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端,，大腸桿菌中常用在N端,。GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 蛋白本身是一個在**過程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶,。一般選擇GST標(biāo)簽的目的有兩個,，一是提高蛋白表達的可溶性，二是提高蛋白的表達量,。蛋白表達純化結(jié)束后需根據(jù)不同的蛋白應(yīng)用而確定是否切除標(biāo)簽,，標(biāo)簽較大，切除與否需根據(jù)下游應(yīng)用考慮,。如果要去除GST融合部分,，可用位點特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。
HIS-Tag由6-10個組氨酸殘基組成,，分子量不到0.84KD,，，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端,。HIS-Tag是目前原核表達常用的標(biāo)簽,，蛋白純化完之后可以不需切除此標(biāo)簽，也不會對蛋白產(chǎn)生功能影響,。同時,，蛋白純化步驟簡便，純化條件溫和,，對蛋白也不會產(chǎn)生太大影響,。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標(biāo)簽如何選擇。
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