本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

嘔吐毒素檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

1 原理及用途
脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱嘔吐毒素素,，由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生，常出現(xiàn)在玉米（穗腐?。?、小麥和大麥（赤霉病）上,。我國谷物中DON的*為1.0mg／kg,。
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米,、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,，DON)，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板,、辣根酶標(biāo)記物,、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,。檢測時,，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的嘔吐毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體,，加入酶標(biāo)記物后,，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負(fù)相關(guān),，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量,。 
2 嘔吐毒素檢測試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：3ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min
2.3 檢測下限：
谷物,、飼料…………………………150ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
嘔吐毒素……………………………………100%
3-乙?；撗跹└牭毒┐?hellip;…………<1%
2.5 樣本回收率：
谷物及配合飼料…………………………85%±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品（黑蓋）：各1ml
0ppb、3ppb,、9ppb,、27ppb、81ppb,、243ppb
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………11ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液A（白蓋）……………………6ml
底物液B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
2X復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀,、打印機(jī),、均質(zhì)器 、振蕩器,、離心機(jī),、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20μl-200μl,，100μl-1000μl,、多道300μl
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結(jié)果,。
5.2 配液：
配液1：復(fù)溶液
將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月,。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 谷物（大米,、玉米、小米等）及飼料處理方法 
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加10ml去離子水,，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；
2）取0.1ml上清,，加入0.9ml復(fù)溶液，混勻,；
3）取50μl進(jìn)行分析,。
樣本稀釋倍數(shù)：50 檢測下限：150ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻,。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋,，保存于2-8℃,。
實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液,。
6.1 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中,，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻,，37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
6.3 洗滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒,，zui后用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100μl/孔,，37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
6.5 洗滌：同上
6.6 顯色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔,，輕輕振蕩5秒混勻,，37℃避光顯色15分鐘。
6.7 終止：加終止液50μl/孔,，輕輕振蕩混勻,，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）,。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成,。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%,，即
百分吸光度值（%）＝
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度,。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析,。（索?。?br />8 注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作,。
8.3 混合要均勻,，洗板要*，在ELISA分析中的再現(xiàn)性,，很大程度上取決于洗板的*性,。
8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板,，避免光線照射,。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),，應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì),。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存,，避免冷凍,。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒,。