本產(chǎn)品僅用于科研,，不用于臨床

伏馬毒素B1檢測試劑盒使用說明書（酶聯(lián)免疫法）

1 伏馬毒素B1檢測試劑盒原理及用途
伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素,，目前已知有28種衍生物,，其中以伏馬毒素B1（FB1）zui為普遍，研究也zui為深入,，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品,，如動(dòng)物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬毒素中zui強(qiáng),，對多種動(dòng)物有較嚴(yán)重的毒理作用,。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥，豬的肺水腫綜合癥,，此外,，還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病,，對畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害,。
試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物,、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成,。檢測時(shí),，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗伏馬毒素B1抗體,，加入酶標(biāo)記物后,，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負(fù)相關(guān),，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量,。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
玉米,、飼料…………………………50ppb
食用油………………………………10ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
伏馬毒素B1…………………………100%
 2.5 樣本回收率：
飼料…………………………………95%±15%
玉米…………………………………100±15%
食用油………………………………85±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml
0ppb,、0.5ppb、1.5 ppb,、4.5ppb,、13.5ppb、40.5ppb
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液A（白蓋）……………………6ml
底物液B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
10X濃縮復(fù)溶液（黃蓋）……………50ml
20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
說明書………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀,、打印機(jī),、均質(zhì)器 、振蕩器,、離心機(jī),、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20µl-200µl,，100µl-1000µl,、多道300µl
4.3 試劑：甲醇
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：樣本提取液
70%甲醇,，即V甲醇:V去離子水=7：3,。
配液2：復(fù)溶液
    將10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋，即：V（10×濃縮復(fù)溶液）:V（去離子水）=1:9,，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月,。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 玉米、飼料處理方法 
1）稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中,，加5ml樣品提取液,，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；
2）取上清0.1ml,，加入1.9ml復(fù)溶液，振蕩2分鐘,；
3）取50μl進(jìn)行分析,。
樣本稀釋倍數(shù)：100   檢測下限：50ppb
（若樣本中伏馬毒素B1的含量較高，可在步驟2）按比例增大稀釋倍數(shù),，檢測出的含量乘以樣本實(shí)際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量）
5.3.1 食用油處理方法
1）稱取5ml樣品于50ml離心管中,，加8ml正己烷和5ml樣品提取液，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；
2）去除上層液體，取100ul下層液體加入1.9ml復(fù)溶液,，混勻,；
3）取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20      檢測下限：10pp
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,，將不用的微孔板放入自封袋,，保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前,，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液,。
6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置,。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液,，用蓋板膜封板,，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘,。
6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜,，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,，每次間隔30秒,，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl,，再加底物液B 50µl,，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘,。
6.5 終    止：每孔加入終止液50µl,，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng),。
6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）,。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值,，再乘以100%,，即
 百分吸光度值（%）＝
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,，更便于大量樣本的準(zhǔn)確,、快速分析。（索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低,。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,，重復(fù)性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,，洗板要*,，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,，用蓋板膜封住微孔板,，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑,。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之,。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí),，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,，避免接觸皮膚,。           
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍,。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年,，生產(chǎn)日期見包裝盒。