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讓大部分ELISA實驗人員頭疼的問題,就是在ELISA實驗后結果不理想,。那碰到這種情況我們應該怎么解決呢,?其實做科研實驗,就是這樣在不斷探索中尋求真理,。很難有人能*的實驗成功,。在做實驗時那些千萬不能忽視的一些小細節(jié),還有我們在做實驗過程中能夠盡量避免一些誤區(qū),。我們來一起簡單了解下影響ELISA實驗結果不理想的因素有哪些,,然后盡量在實驗的時候避開這些誤區(qū)。
1. 操作前應對實驗的物理參數有充分的了解,,如環(huán)境溫度(保持在18 c~25℃),、反應孵育溫度和孵育時間,、洗滌的次數等,要先查看水育箱溫度,,是否符合要求,。
2. 正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,避免刮擦包被板底部,。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應孔壁上,,加樣器吸頭要清洗干凈,,避免污染,加樣次序要與說明書一致,,否則可導致結果錯誤,,實驗重復性差。
3. 手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,,洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數,,洗液在反應孑l內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑l間竄流,,造成孔問污染,,導致假陰性或假陽性。
4. 要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,,滴瓶不易控制加液量不準,,造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯誤,。
5. 顯色液量不可過多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,,加顯色系統(tǒng)后要避光反應,顯色液量不能過多,,以免顯色過強,。ELISA試劑盒的影響因素應選用有國家批準文號,質量靠得住的產品,,不能圖便宜,,忽視質量保證。試劑應妥善保存于4℃冰箱內,,在使用時先平衡至室溫,,不同批號的試劑組分不宜交叉使用。試劑開啟后要在一周內用完,,剩余的試劑下次用時應先檢查是否變質,,顯色劑如被污染變色將造成全部顯色,導致錯誤結果,。
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