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研域ELISA生物實驗是一種敏感性高,,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法,。用于ELISA試劑盒實驗包被固相載體的抗原可以按其來源不同分為三類:天然抗原,、重組抗原和合成多肽抗原。
天然抗原可取自動物組織,、微生物培養(yǎng)物等,,須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取,,一般的細菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取,,蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等。
重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達的蛋白質(zhì)抗原,,多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體,。重組抗原的優(yōu)點是除工程菌成份外,,其他雜質(zhì)少,而且無傳染性,,但純化技術(shù)難度較大,。
合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個抗原決定簇,,純度高,,特異性也高,但由于分子量太小,,往往難于直接吸附于固相上,。多肽抗原的包被一般需先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)(BSA)等偶聯(lián),借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附,,間接地結(jié)合到固相載體表面,。
ELISA試劑盒實驗包被用抗體應(yīng)具有高親和力和高特異性,可取材于抗血清或含單克隆抗體的腹水或培養(yǎng)液,。如免疫用抗原中含有雜質(zhì)(即便是極微量的),,在抗血清中將出現(xiàn)雜抗體,必須除去(可用吸收法)后才能用于ELISA,,以保證試驗的特異性,。抗血清不能直接用于包被,,應(yīng)先提取IgG,,通常采用硫酸銨鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一般經(jīng)硫酸銨鹽析粗提的IgG已可用于包被,,高度純化的IgG性質(zhì)不穩(wěn)定,。如需用高親和力的抗體包被以提高試驗的敏感性,則可采用親和層析法以除去抗血清中含量較多的非特異性IgG,。腹水中單抗的濃度較高,,特異性亦較強,因此不需要作吸收和親和層析處理,,一般可將腹水作適當稀釋后直接包被,,必要時也可用純化的IgG。應(yīng)用單抗包被時應(yīng)注意,,一種單抗僅針對一種抗原決定簇,,在某些情況下,用多種單抗混合包被,,可取得更好的效果,。
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