北京瀚時天暉分析儀器有限公司--專業(yè)研制生產(chǎn)銷售：

原子吸收光譜儀（CAAM-2001系列）,、金屬套玻璃霧化器（WNA-系列）,、氫化物發(fā)生器（WHG-103A型）、高性能空心陰極燈,，電子天平,、微波消解儀等以及各種實驗室裝備儀器及耗材。：  84782259

中藥中微量元素和有機(jī)成分的分析

０　引　言

中藥為我國*且豐富的天然資源,，其組成復(fù)雜,。中藥療效與其所含無機(jī)微量元素及有機(jī)成分有著密切關(guān)系的，中藥無機(jī)微量元素在生物體內(nèi)是與生物大分子相互作用,，從而達(dá)到治療的效果,。解決以上組分的分析問題對研究中藥微量元素在藥物中作用，藥物的作用機(jī)理,，中藥檢測現(xiàn)代化以及中藥進(jìn)入市場有著重要意義,。

1  實驗部分

1.1  儀器與試劑

    儀器：DW-2調(diào)溫電熱器，超聲波振蕩器,，WPG-100平面光柵攝譜儀，2kW高頻發(fā)生器（北京廣播器材廠）,，原子吸收分光光度計（含金屬套玻璃霧化器）,，石墨爐電源及爐體（日立），CHI660電化學(xué)工作站,，Pt電極,，玻碳電極，SC-2000氣相色譜儀（重慶川儀九廠）,，日本島津氣相色譜儀（LC-10A HPLC）,。

     試劑:石油醚（沸程30~60℃），甲醇,，硝酸 （1:1）,，鹽酸，氨水,，吡咯啶二硫代氨基甲酸銨（APDC）,，甲基異丁酮（MIBK）,，高氯酸， K₃Fe（CN）₆（2.0×10^-3mol/L）,，內(nèi)標(biāo)物：準(zhǔn)確稱取0.0150g碳十六烷標(biāo)樣,，置于5mL帶刻度試管中，用石油醚稀釋至刻度,，龍腦標(biāo)液：準(zhǔn)確稱取0.0170g龍腦標(biāo)液,，置于5mL帶刻度試管中，用石油醚稀釋至刻度,，流動相：甲醇-水-甲酸（40：60：1）,。銅標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0×10^-2 mol/L，稱取一定量金屬銅（99.999%）,，溶解于10mL硝酸 （1:1）,，轉(zhuǎn)移至容量瓶中稀釋定容。

1.2  實驗步驟

1.2.1 揮發(fā)油的提取

    精密稱取菊花50 g裝入1500mL圓底燒瓶中,，加入600mL蒸餾水振蕩搖勻后,，稍浸片刻，連接揮發(fā)油測定裝置系統(tǒng),，再加1mL石油醚,，浮于揮發(fā)油測定系統(tǒng)的上層，先加熱至沸騰,，再控溫保持沸騰,，蒸餾8 h，停止加熱,。冷卻后,，從冷凝管上端加少量石油醚（1mL左右）沖洗冷凝管，放置使分層*,，打開測定器下端活塞,，收集石油醚層。所的樣品用于毛細(xì)管氣相色譜分析,。

1.2.2 綠原酸的提取

    取金銀花0.3g,，于50℃恒溫烘烤90min，研碎,，精密稱取0.1g,，加甲醇3.0mL，浸泡數(shù)周,。所的樣品用于液相色譜分析

1.2.3 痕量元素的分離富集

取粉末狀漏蘆1g,，加入40mL硝酸浸泡，蓋上表面皿,，在室溫下緩慢反應(yīng)1h,，移至電熱板上,，加10mL高氯酸（HClO₄），緩慢加熱硝化樣液,，并酌情補(bǔ)加硝酸,，至硝化液清亮呈淺黃色，趕酸至濕鹽狀,，加入20 mL蒸餾水微熱溶解,，并用1：9的鹽酸和1：9的氨水將溶液pH值調(diào)至3~4，在不斷攪拌下加入2mL 2％吡咯啶二硫代氨基甲酸銨（APDC）,，再將溶液pH值調(diào)至3~4,，然后移至分液漏斗中，振蕩4分鐘,，讓其充分絡(luò)合,，加入20mL甲基異丁酮（MIBK），繼續(xù)振蕩10min,，靜止分層,，棄去水相。在其中一份試樣的有機(jī)相中加入6mol/L HCI 10mL反萃,，振蕩25 min,，收集水相。在另一份試樣的有機(jī)相中加入9mo l/LHCI 反萃,，振蕩25min,，收集水相。樣品用于電化學(xué)和原子發(fā)射光譜分析,。

1.2.4 微量元素測定前樣品的處理

取1.2.3中分離后的水樣5.0mL置于100mL錐形燒瓶中,，在加熱器上加熱蒸發(fā)至近干。稍冷后加入1.0mL HNO₃蒸發(fā)至近干,，再加入0.1mL H₂SO₄趕除HNO₃,，蒸發(fā)至霧白色的H₂SO₄霧在燒瓶底部出1 min。冷卻后小心加水5mL,，再加熱使鹽類*溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,，定容,。

 結(jié)果與討論

2.1 電感耦合高頻等離子體發(fā)射光譜法（TCP－ICS）測定中草藥中的微量鉻

在2kw高頻發(fā)射器和載氣壓力為0.8kg/cm² ，光柵1200條/mm,，曝光時間40s的條件下,，對鉻含量為0.4，1.0,，2.0,，4.0和8.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和前面所得的分離富集提取液同樣操作,，攝譜二帶并找出每條譜帶中鉻元素的分析線，測出其黑度值,，結(jié)果如下：

中藥樣品定容為5mL,，由黑度特征曲線可得出被測元素Cr的含量為：0.9897 μg/mL，即4.9483×10^-3mg/g漏蘆,。

2.2 溶出伏安法測定中草藥中銅的含量及其電極反應(yīng)的研究

2.2.1 取5.0mL的分離富集液,，0.1mL 2.0mol/L的Hg（NO₃）₂，1.0mL1.0mol/L KNO₃和4.0mL去離子水于10mL的小燒杯中,，溶出伏安法測定該溶液和加入0.20mL 1.0×10^-3mol/LCu²⁺的標(biāo)準(zhǔn)溶液后混合溶液的峰值電位和平均峰高值,。根據(jù)“標(biāo)準(zhǔn)加入法”計算公式得出”Cu²⁺含量為：

C_cu²⁺=C_s×S_x/（S_T-S_X）=1.0×10^-3×6.830×10^-7/（6.2494×10^-5-6.830×10^-7）=1.107×10^-5 mol/L

在測量過程中，為了保持較好的重現(xiàn)性,，加入Cu²⁺前后沉積時間攪拌速率等實驗條件嚴(yán)格一致,。

2.2.2 采用“循環(huán)伏安法”，在1.0×10^-3mol/LKNO₃溶液中,，以掃描速度為20,，40，60,，80,，100mv/s 記錄-0.5~+0.8（init）范圍內(nèi)的循環(huán)伏安圖。

結(jié)果如下：

 作出ΔEp對掃描速度V和 i_pc,，i_pa對掃描速度v及對V^1/2的變化曲線：

1.ΔEp對V的關(guān)系曲線（圖1）：                2.i_pc對掃描速度V的關(guān)系曲線（圖2）：

3.i_pa對掃描速度V的關(guān)系曲線（圖3）：           4.i_pc對掃描速度V^1/2的關(guān)系曲線（圖4）：

5.i_pa對掃描速度V^1/2的關(guān)系曲線（圖5）：

由此可以看出：

電極反應(yīng)： Fe（CN）₆ ^3-  ＋ e → Fe（CN）₆ ^2- 在該體系內(nèi)可近似為可逆反應(yīng),，與理論相符。

2.2.3 在0.1mol/LH₂SO₄（支持電解質(zhì)）和0.001mol/LCuSO₄標(biāo)準(zhǔn)溶液中,，以掃描速度20,，40，60,，80,，100 mv/s 記錄-0.5v――+0.8v（init）范圍內(nèi)的循環(huán)伏安圖。

結(jié)果如下：

ΔEp對V的關(guān)系曲線（圖6）                       i_pc對掃描速度V的關(guān)系曲線（圖7）：

i_pa對掃描速度V的關(guān)系曲線（圖08）：

比較Fe（CN）₆ ^3-與Cu²⁺的CV圖以及在電化學(xué)工作站上模擬的電極過程可得知：Cu²⁺的電極反應(yīng)不是可逆反應(yīng),，在Cu-e →Cu⁺電極反應(yīng)過程中,，Cu是固定于電極的表面上，此電極反應(yīng)控制步驟不是溶液的擴(kuò)散控制過程,，其峰形為一對稱峰,。

2.2.3在0.1 mol/L KCl，0.001mol/L CuSO₄的溶液中,，記錄掃描速度為100 mv/s-0.8―+0.6v,，-0.1―+0.6v，-0.8―+0.1v范圍內(nèi)對應(yīng)的cv圖， 同時在0.1 mol/L NH₃•H₂O－NH₄Cl,，1.0x10^-3 mol/L CuSO₄的溶液中,，記錄掃描速度為100 mv/s，-0.8――+0.6v,， -0.1――+0.6v,，-0.8――+0.1v范圍內(nèi)對應(yīng)的cv圖，將二者的 cv圖比較：NH₃•H₂O－NH₄Cl中對應(yīng)的cv圖的電極反應(yīng)峰后移,，這是因為Cu²⁺在能與NH₃.H₂O生成絡(luò)離子Cu（NH₃）²⁺,，從而溶液中的Cu²⁺的活度降低，相應(yīng)的電極反應(yīng)峰后移,，這可以歸結(jié)成濃度的變化,，由二電極反應(yīng)峰對應(yīng)的電勢差可以得出絡(luò)離子Cu（NH₃）²⁺的K_不穩(wěn)。

2.3 毛細(xì)管氣相色譜法測定中草藥中的揮發(fā)性有機(jī)物

2.3.1取龍腦標(biāo)液,，內(nèi)標(biāo)物液各50μL置入1mL塑料離心管中,，混合均勻，進(jìn)樣0.4uL,，測定龍腦校正因子,。

2.3.2提取的揮發(fā)油與石油醚混合物靜置分層，轉(zhuǎn)入1mL塑料離心管中用水泵抽去石油醚,。在120℃（10min）→200（20min）的程序升溫（5℃/min）的條件下測定0.4μL的內(nèi)標(biāo)物＋龍腦標(biāo)樣,，稱量的揮發(fā)油＋0.2 mL的內(nèi)標(biāo)物的保留值和峰面積。

內(nèi)標(biāo)物的相對保留時間為：t_R＝3.98min-1.12min＝2.86min

龍腦兩次的相對保留時間分別為：t_R’（1）＝6.37min-1.06min＝5.31min

                t_R’（2）＝6.42min-1.07min＝5.35min

龍腦相對于內(nèi)標(biāo)物的相對校正因子為：

                f^A_is（1）＝A_sm_i/A_im_s=2130×0.0170/15107×0.0150＝0.1598

                f^A_is（2）＝A_sm_i/A_im_s=2585×0.0170/16846×0.0150＝0.1739

            則：f^A_is＝（0.01598+0.01739）/2＝0.1669

測定的圖譜中有一相對保留時間為t_R＝6.7min-1.16min＝5.54min,，可以判斷該峰所代表的物質(zhì)即為龍腦,；相對保留時間為t_R＝4.00min－1.16min＝2.84min，該峰所代表的物質(zhì)即為內(nèi)標(biāo)物,。

故揮發(fā)油中龍腦的含量為：

wi＝A_i×m_s×f^A_is/A_sm_i＝54485×（0.21×0.0150/5）×0.1669/16681×0.0275＝1.25%

2.4 液相色譜法測定中草藥中有機(jī)綠原酸

2.4.1用甲醇稀釋中藥樣品,，過濾樣品；

2.4.2 HPLC“歸一法”測定樣品中綠原酸含量：進(jìn)中藥樣品6μl（平行進(jìn)2次）測得綠原酸的濃度,。兩次測得的濃度分別為：C₁＝44.6472％,；C2＝33.7824％

故稀釋后用品中綠原酸的濃度為：

    　　C=（44.6472%+33.7824%）/2= 39.2148％

參 考 文 獻(xiàn)

[1]周泰山主編.化學(xué)分離富集方法及應(yīng)用. 長沙：中南工業(yè)大學(xué)出版社，1997

[2]趙文寬,，張悟銘,，王長發(fā)等編.儀器分析試驗。北京：高等教育出版社,，1998

[3]T M Flarence,， J Electroanal.Chem，1970（27）：273

[4]A J Bard,，et al.Electrochemical Methods.Fundamentals and Applications.1980

[5]武漢大學(xué)化學(xué)系.儀器分析.北京.高等教育出版社，2001

[6]吳采櫻，曾昭睿等編.現(xiàn)代毛細(xì)管柱氣相色譜法.武漢：武漢大學(xué)出版社,，1990

[7]洪莜坤等.中成藥,，2000，22（1）:80—100

[8]朱清等.中國實驗方劑學(xué)雜志,，1996,，2（5）：5—7

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