【飛諾美色譜】
作為微觀世界探索者,，色譜工作者有時候像一位運籌帷幄決勝于千里之外的戰(zhàn)略家,，有時候又像一位謀士,，對微小的“變化"作出嚴謹縝密的判斷。在方法開發(fā)過程中,，pH就是分析勝敗的關鍵因素,，選擇正確或優(yōu)化的pH值往往是致勝關鍵一步。
無論反相,、HILIC還是離子交換模式,，樣品和流動相的pH值對于您的分析獲得理想結果至關重要。那么,，你知道pH的概念是如何產生的嗎,？
pH
pH的概念是丹麥化學家S.P.L.索倫森在1909年提出的。
基本概念：pH是水溶性物質的酸度或堿度的量度,。
更復雜的概念：液體中氫離子(H+)濃度相對于給定標準溶液的測量值,。
更更復雜的概念：pH值是氫離子濃度(H+)的負對數，pH=-Log[H+]
現在,，問題來了,，pH中的“p"是什么？
無論何時,，當你在pH值,、pKa值、pKb值前看到一個“p",，這意味著你正在處理“p"后的數值的負對數,。“p"的確切含義是有爭議的，但根據索倫森1909年提出的,，pH代表“氫的力量",。因此，“p"也可以代表“p"之后的值的冪,。因此,，pH由溶液中氫離子活性的負對數來定義。純水的電導率較低,，僅輕微電離,，但是當水離解時，會形成：
H2O?H++OH–
其中,，H+是氫離子的活性,，OH–是氫氧根離子的活性。H+和OH-離子的濃度在25攝氏度時等于1×10-7離子/升,。pH值刻度是由水的自動離解特性產生的,。
pH=-Log[H+]/1x10-7lons/Liter
pOH=-Log[OH-]/1x10-7lons/Liter
[H+]+[OH-]=1x10-14
[-LogH+]+[-LogOH–]=14
“p"=-Log10
pH+pOH=14
上面的等式將pH標度設置為0-14，這給出了表示14個數量級的[H+]離子的方便方法,。
電離度或離解度
要了解流動相中pH值的真正意義,，首先我們需要了解酸性或堿性化合物的電離度或離解度?；衔锏膒H值可以表明你處理的是酸還是堿,，但它提供的指示酸或堿的真實強度的信息有限，這就是電離或離解度概念的來源,。
pKa=[-LogKa]
pKb=[-LogKb]
Ka=酸離解常數或[H+]離子濃度
Kb=堿離解常數或[OH–]離子濃度
大多數弱酸的Ka在10-2到10-14之間,，因此，大多數弱酸的pKa在2-14之間,。
酸越強,，它的pKa值越小，堿越強,，它的pKb值越大,。接下來，我們將主要使用術語“pKa"來解釋這個概念,。
所有可以被反相色譜分析的分析物都會發(fā)生輕微電離,，因此，它們可以是“弱酸"或“弱堿",。因此,，在處理這類極性化合物（弱酸或弱堿）時，您應該始終了解化合物的pKa或pKb值,，因為這將有助于您確定流動相的正確pH值,。
在反相色譜中,，為了實現分析物的分離和良好的峰形，疏水和一些離子相互作用在固定相和分析物之間的選擇性中起主要作用,。為了實現這一目標,，化學家的主要目標應該是得到處于單一狀態(tài)、去質子或未電離狀態(tài)的所需分析物,。分析物的電離狀態(tài)直接影響分析物與固定相的相互作用程度,。
當一個分子被電離時，它的極性更大,，因此更有可能參與氫鍵,。與中性分子相比，在具有水性流動相的反相中,，分析物將花費更少的時間與固定相發(fā)生疏水相互作用,，而花費更多的時間與流動相的水性部分形成氫鍵，結果是極性分子的保留更少,。
當分析物的電離形式和中性形式的濃度都很高時,，電離形式的疏水性相互作用較小，而中性形式的疏水性相互作用較大,，結果會出現寬且不對稱的峰,。
硅膠中存在的少量游離硅烷醇基團或金屬污染物可能會與分析物的離子化狀態(tài)發(fā)生離子相互作用，從而導致峰形不佳或不可重現,。
現在,，通過了解分析物的pKa值，可以預測分析物相對于流動相pH值的電離狀態(tài),，換句話說，我們可以通過簡單地調節(jié)流動相pH值來控制分析物的電離狀態(tài),。
因此,，對于酸：
| when pH=pKa-2 | The acid is 1% dissociated (mostly deprotonated). |
| When pH=pKa | The acid is 50% dissociated (equal amounts of ionized and unionized). |
| When pH=pKa+2 | The acid is 99% dissociated (mostly ionized). |
對于堿：
| When pH=pKa-2 | The base is 99% dissociated (mostly ionized). |
| When pH=pKa | The base is 50% dissociated (egual amounts of ionized and unionized). |
| When pH=pKa+2 | The base is 1% dissociated (mostly deprotonated). |
上表中的值可為根據分析物的pKa值決定流動相的pH值提供指導。為了最大限度地中和分析物,，流動相的pH值必須比pKa值高或低至少2個單位,。
由于液相色譜處理部分或極性的化合物，液相色譜面臨的兩個主要挑戰(zhàn)是酸性化合物的保留和堿性化合物的峰形,，幸運的是,，這兩個問題都可以通過選擇和控制適合您的樣品和流動相的最佳pH值來解決。下圖恰當地展示了選擇與酸性和堿性化合物的保留時間和峰形相關的正確流動相pH值的好處,。
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