柱外體積是液相色譜中死體積重要的組成部分,，它包括進(jìn)樣器體積，混合器體積,，色譜柱前后連接管路的體積,，連接配件等所產(chǎn)生的空間，以及檢測器流通池體積,。根據(jù)您使用的系統(tǒng)和應(yīng)用,，在HPLC上開發(fā)超高性能方法需要優(yōu)化上述配件以減少柱外體積。
測量柱外體積的方法
等度法
等度方法的系統(tǒng)體積測量相當(dāng)簡單,，可以直接在系統(tǒng)上進(jìn)行,，而無需更改流動相。首先,，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱,。然后以固定流速啟動HPLC，并在系統(tǒng)中注入少量丙酮或其他有UV吸收組分,，并在270nm或220nm處進(jìn)行監(jiān)測,。從丙酮進(jìn)樣到色譜圖中開始出峰的時間表明了系統(tǒng)的柱外體積。計(jì)算方法如下：
調(diào)整進(jìn)樣器和色譜柱入口之間的流路以及柱后流路可以減小該體積,。
梯度法
雖然梯度法的柱外體積測量并不像等度法那么簡單,，但它操作起來也并不復(fù)雜。首先,，取出HPLC色譜柱并用零死體積兩通替換色譜柱,。一個流動相是水，另一相是乙腈,，并在流動相B中添加一定量的丙酮,，此時需要切換流動相，并在適當(dāng)?shù)牟ㄩL下監(jiān)測紫外線以檢測丙酮（220nm或270nm都可以）,。梯度法即系統(tǒng)保持在100%A（1-2分鐘），然后在幾分鐘內(nèi)從0%至100%B梯度,。從梯度開始時間到UV信號基線上升的時間延遲即為總的系統(tǒng)體積,。計(jì)算也很簡單：
梯度法柱外體積測試方法作為優(yōu)化HPLC系統(tǒng)的重要工具，以更好的配合核殼填料（Kinetex）的柱效優(yōu)勢,。在柱外體積測試期間,，也可以交替使用進(jìn)樣器旁路與主路，以查看進(jìn)樣器回路對整個HPLC系統(tǒng)死體積的影響,。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
7
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)