高效液相色譜法包括正相色譜和反相色譜兩種,，用于分離,、定量、鑒定和分析化學(xué)或生物樣品的成分,。然而,，這兩種方法彼此之間有很大的不同，在大多數(shù)情況下反相HPLC是更好的選擇,。
在正相HPLC中,，樣品的分離是通過在固定相中使用親水性基團(tuán)（容易溶于水或被水吸收）來完成的，使極性成分最后被分離出來,。在這種情況下,，固定相是極性的,，而流動相是非極性的。
在反相HPLC中正好相反,。首先需要去除極性成分,，并且在固定相中使用親脂性基團(tuán)（可以溶解在脂質(zhì)、脂肪,、油和非極性溶劑中）,。在這種情況下，固定相是非極性的,，流動相是極性的,。
反相HPLC的優(yōu)勢
反相HPLC可以在流動相中使用水或水性溶劑。與正相HPLC相比,，具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢：
? 與其他HPLC方法相比,，成本更低
? 溶劑毒性較低，對環(huán)境的危害較小
? 獲得準(zhǔn)確結(jié)果的同時(shí),，需要更小的樣本量
? 減少溶劑蒸發(fā)
? 可以通過調(diào)節(jié)pH值,，改善樣品分離的能力
? 固定相可以保留大多數(shù)的有機(jī)分子
? 降低分析物保留時(shí)間偏移情況的出現(xiàn)
? 提高梯度分離的準(zhǔn)確性
除此之外，使用反相HPLC還有另一個(gè)顯著優(yōu)勢,。由于使用疏水性的固定相,，反相HPLC有分析含有極性(親水)，非極性(疏水),，離子和可電離化合物樣品的能力,。
這些化合物在許多方面具有相似性，用其他方法可能難以分離,。反相HPLC可以準(zhǔn)確分析這些特征相似的物質(zhì)從而顯著提高了該方法所適用的樣品類型的靈活性,。
然而，任何事物都會有它的缺點(diǎn),，反相HPLC的缺點(diǎn)是：
? 需要不斷提升分離技術(shù)及能力
? 難以分析胺和水不溶性化合物
? 需要提升系統(tǒng)耐壓能力
? pH值大于7.5時(shí)硅膠會溶解
? 無法回收洗脫的樣品
? 需要使用其他方法來識別分析物
盡管存在這些缺點(diǎn)，但是因?yàn)榫哂袕V泛的適用性,，且易于重現(xiàn),，反相HPLC依然是常用的分離技術(shù)之一。
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