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一,、應(yīng)用概述

液相色譜柱具有一個理想的流速或流速范圍，在這個范圍內(nèi),，色譜柱的效率蕞高,。衡量色譜柱性能的這一指標通常被稱為范迪姆特曲線，在該曲線中,，將理論塔板高度（HETP）與流速作圖,。在這種情況下，對于給定的色譜柱,，塔板數(shù)被繪制成與流速的關(guān)系圖,。峰越窄，理論塔板數(shù)就越多,。通過色譜柱的流速優(yōu)化以獲得最大的理論塔板數(shù),。

低流速會因擴散而降低柱效率。擴散是由于樣品在通過檢測器之前,于管道和色譜柱中停留的時間過長而導(dǎo)致的,。

在高于理想流速的情況下,，效率會因湍流而損失。湍流的影響與擴散相同,。結(jié)果峰在基部變寬并呈現(xiàn)圓頂形狀,。在某些情況下，色譜柱可能會在效率下降之前出現(xiàn)超壓的情況,。

二,、一般方法

正相色譜柱安裝在ISCO CombiFlash® Sq 16x上，該設(shè)備被編程以運行不同的流速,。正相雙峰標準是4-甲氧基苯乙酮和苯乙酮,。流動相A是己烷，流動相B是乙酸乙酯,。對標準品進行理論塔板數(shù)分析,，并將塔板數(shù)與流速作圖。每種色譜柱尺寸都有一個針對該尺寸優(yōu)化的沖提流速,。在任何單一運行中,，流速是口隹一被改變的參數(shù)，以建立效率曲線,。

通過使用氯仿作為流動相并注射庚烷作為未保留的標準品，可以確定正相色譜柱的有效柱體積,。從注射到檢測的時間間隔是儀器和色譜柱的空白體積,。扣除儀器的空白體積后，剩余部分即為色譜柱的有效間隙空白體積,。

三,、分析結(jié)果

RediSep 4克正相色譜柱

根據(jù)所述方法，測定的色譜柱體積為4.8 mL,。這些色譜柱的最佳流速約為18 mL/min,。4克色譜柱具有非常靈活的流速范圍，在該范圍內(nèi)（16-22 mL/min）性能非常相似,，并且可以使用更寬的范圍（12-25 mL/min）,。這是通過使用標準品測試色譜柱確定的。通過改變流速,，可以改變色譜柱的效率,，從而改變理論塔板數(shù)，然后將這些數(shù)據(jù)與流速作圖（圖1）,。

圖1：4克正相效率曲線

RediSep 12克正相色譜柱

根據(jù)所述方法,，測定的色譜柱體積為16.8 mL。最佳流速約為30 mL/min,。12克色譜柱具有非常靈活的流速范圍,，在該范圍內(nèi)（25-40 mL/min）性能非常相似，并且可以使用更寬的范圍（15-50 mL/min）,。這是通過使用標準品測試色譜柱確定的,。通過改變流速，可以改變色譜柱的效率,，從而改變理論塔板數(shù),，然后將這些數(shù)據(jù)與流速作圖（圖2）。

圖2：12克正相效率曲線

RediSep 40克正相色譜柱

根據(jù)所述方法,，測定的色譜柱體積為48 mL,。在效率曲線中，通過在多種流速下采集數(shù)據(jù)以最小化變異性,。所使用的標準品是40克正相雙峰標準,。40克色譜柱具有非常靈活的流速范圍，最佳性能出現(xiàn)在35-40 mL/min,，而更寬的可用范圍是25-50 mL/min,。這是通過使用標準品測試色譜柱確定的。通過改變流速,，可以改變理論塔板數(shù),，然后將這些數(shù)據(jù)與流速作圖（圖3）。

圖3：40克正相效率曲線

RediSep 120克正相色譜柱

根據(jù)所述方法,，測定的色譜柱體積為192 mL,。在效率曲線中，通過在多種流速下采集數(shù)據(jù)以最小化變異性。所使用的標準品是120克正相雙峰標準,。120克色譜柱具有非常靈活的流速范圍,，最佳性能出現(xiàn)在75-95 mL/min，而可用范圍是60-120 mL/min,。上限流速的決定因素顯然是背壓而不是色譜柱性能,。這是通過使用一致的標準品測試色譜柱確定的。通過改變流速,，可以改變理論塔板數(shù),，然后將這些數(shù)據(jù)與流速作圖（圖4）。

圖4: 120克正相效率曲線

四,、總結(jié)

RediSep 4克正相色譜柱的柱體積為4.8 mL,，最佳流速約為18 mL/min，范圍為16-22 mL/min,。

RediSep 12克正相色譜柱的柱體積為16.8 mL,，最佳流速約為30 mL/min，范圍為25-40 mL/min,。

RediSep 40克正相色譜柱的柱體積為48 mL,，最佳流速約為40 mL/min，可用范圍為25-50 mL/min,。

RediSep 120克正相色譜柱的柱體積為192 mL,，最佳流速約為85 mL/min，范圍為60-120 mL/min,。

表1包含了有關(guān)在運行結(jié)束時清除色譜柱中溶劑所需的空氣吹掃時間的附加參數(shù),。使用時，固體樣品負載筒也必須進行吹掃,。對于5克筒尺寸,，空氣吹掃時間需增加1分鐘；對于25克尺寸,，需增加2.5分鐘,。

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