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      種子發(fā)芽率是指在最適宜條件下,，在規(guī)定天數(shù)內(nèi)，發(fā)芽的種子占供試種子的百分數(shù),。它是決定種子品質(zhì)和實用價值大小的主要依據(jù),，與播種時的用種量直接有關。但是常規(guī)方法（直接發(fā)芽）測定發(fā)芽率所需時間較長,，特別是有時為了應急需要,，沒有足夠的時間來測定發(fā)芽率，遇到休眠種子也無法知道,?？焖贉y定法則能在較短時間內(nèi)獲得結果。

Ⅰ．氯化三苯四氮唑法（ TTC法）

原理

　　凡有生命活力的種子胚部,，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應,，而無生命省略的種胚則無此反應。當TTC滲入種胚的活細胞內(nèi),，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH2 或NADPH2 ）上的氫還原時,，便由無色的TTC變?yōu)榧t色的三苯基甲（TTF）。

儀器藥品

　　光照培養(yǎng)箱 　 燒杯

　　培養(yǎng)皿 　　　鑷子

　　刀片 　　　　天平

　　0.5% TTC溶液：稱取0.5g TTC放在燒杯中,，加入少許95%乙醇使其溶解,，然后用蒸餾水稀釋至100ml。溶液避光保存,，若變紅色,，即不能再用。

操作步驟

　　1．浸種

　　將待測種子在30─35℃溫水中浸種（大麥,、小麥,、秈谷6─8小時，玉米5小時左右,，粳谷2小時）,，以增強種胚的呼吸強度，使顯色迅速,。

　　2．顯色

　　取吸脹的種子200粒,，有刀片沿種子胚的中心線縱切為二半，將其中的一半置于2只培養(yǎng)皿中,，每皿100個半粒,，加入適量的0.5% TTC，以覆蓋種子為度,。然后置于30℃光照培養(yǎng)箱中0.5─1小時,。觀察結果，凡胚被染為紅色的是活種子,。

　　將另一半在沸水中煮5分鐘殺死胚,，作同樣染色處理,，作為對照觀察。

　　3．計算活種子的百分率,，如果可能的話與實際發(fā)芽率作一比較,，看是否相符？

Ⅱ．溴麝香草酚藍法（ BTB法）

原理

　　凡活細胞必有呼吸作用,，吸收空氣中的O2 ,，放出CO2 。CO2 溶于

增加,，可用溴麝香草酚藍（BTB）來測定酸度的改變,。BTB的變色范圍為pH6.0─7.6，酸性呈黃色,，堿性呈藍色,，中間經(jīng)過綠色（變色點為pH7.1）。色澤差異顯著,，易于觀察,。

儀器藥品

　　光照培養(yǎng)箱　 天平

　　培養(yǎng)皿　　　 燒杯

　　鑷子 　　　　漏斗

　　濾紙　　　　 洋菜

　　0.1%BTB溶液：稱取BTB0.1g，溶解于煮沸過的自來水中（配制指示劑的水應為微堿性,，使溶液呈藍色或藍綠色,，蒸餾水為微酸性不宜用），然后用濾紙濾去殘渣,。濾液若呈黃色,，可加數(shù)滴稀氨水，使之變?yōu)樗{色或藍綠色,。此液貯于棕色瓶中可長期保存,。

　　1%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液100ml置于燒杯中，將瓊脂剪碎后加入,，用小火加熱并不斷攪拌,。待瓊脂溶解后,，趁熱倒在數(shù)個干潔的培養(yǎng)皿中,，使成一均勻的薄層，冷卻后備用,。

操作步驟

　　1．浸種

　　 同上述TTC法,。

　　2．顯色

　　取吸脹的種子200粒，整齊地埋于準備好的瓊脂凝膠培養(yǎng)皿中,，種子平放,，間隔距離至少1cm。然后將培養(yǎng)皿置于30─35℃光照培養(yǎng)箱下培養(yǎng)2─4小時,，在藍色背景下觀察,，如種胚附近呈現(xiàn)較深黃色暈圈是活種子,，否則是死種子。

　　用沸水殺死的種子作同樣處理,，進行對比觀察,。

　　3．計數(shù)種胚附近出現(xiàn)黃色暈圈的活種子數(shù)，算出發(fā)芽率,。

Ⅲ ．紅墨染色法

原理

　　凡生活細胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力,，而死的種胚細胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便能進入死細胞而染色,。

儀器藥品

　　1．浸種

　　同上述TTC法,。

　　2．染色

　　取已吸脹的種子200粒，沿胚的中線切為兩半,，將一半置于培養(yǎng)皿中,，加入5%紅墨水（以淹沒種子為度），染色10梍15分鐘（溫度高時間可短些）,。染色后倒去紅墨水,，用水沖洗多次，至沖洗液無色為止,。檢查種子死活,，凡種胚不著色或著色很淺的為活種子；凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子,?？捎梅兴畾⑺赖姆N子作對照觀察。

　　3．計數(shù)種胚不著色或著色淺的種子數(shù),，算出發(fā)芽率,。

Ⅳ．紙上熒光法

原理

　　具有生活力的種子和已經(jīng)死亡的種子，它們的種皮對物質(zhì)的透性是不同的,，而許多植物的種子中又都含有熒光物質(zhì),。利用對熒光物質(zhì)的不同透性來區(qū)分種子的死活，方法簡單,，特別是對十字花科植物的種子,，尤為適用。

儀器藥品

　　紫外熒光燈　　 培養(yǎng)皿

　　鑷子　　　　　 濾紙（無熒光）

操作步驟

　　1．將完整無損的種子（油菜,、白菜等十字花科植物的種子100粒,，于25─30℃水中浸泡2─3小時。

　　2．把已吸脹的種子,，以3─5mm間隔整齊地排列在培養(yǎng)皿中的濕濾紙上,，濾紙上水分不能過多，以免熒光物質(zhì)流散彼此影響。培養(yǎng)皿可以不必加蓋,，放置1.5─2小時,，取去種子，將濾紙陰干,。取出的種子仍按原來順序排列在另一培養(yǎng)皿中（以備驗證）,。

　　3．將陰干的濾紙置于紫外熒光燈下進行觀察，觀察如能在暗室中進行,，則效果更好,。

　　4．在放過種子的位置上如見到熒光圈，則為死種子,。如要確證它們是死種子,，可將排列在另一培養(yǎng)皿中的這些種子揀出來，集中在一只培養(yǎng)皿的濕濾紙上,，而讓不產(chǎn)生熒光圈的種子留在培養(yǎng)皿中,，維持濕度，讓其自然發(fā)芽,。

　　5．3─4天后記錄培養(yǎng)皿中發(fā)芽種子數(shù),，填入下表中。

　　此方法的成敗,，首先決定于種子中熒光物質(zhì)的存在,，其次決定于種皮的性質(zhì)。有些種子無論有無發(fā)芽能力,，一經(jīng)浸泡,，即有熒光物質(zhì)透出，大豆即屬此類,；

也有些種子由于種皮的不透性,，無論種子死活，都不產(chǎn)生熒光圈,，許多植物的種子都會碰到這種個別現(xiàn)象,，此時只有用機械方法擦傷種皮，可重行驗證,。相反,，有時由于收獲時受潮，種皮已破裂,，也會產(chǎn)生熒光圈,，試驗時都應該注意,。最好將浸泡液進行檢查,，沒有熒光則適于作試驗材料。

• 微生物培養(yǎng)光照培養(yǎng)箱

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