人血管生成素1（ANG-1）Elisa試劑盒

Human Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit

貨號：KB1000A

包裝：96T/48T
檢測標(biāo)本：包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水,、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等,。
保存：2-8℃,，6個月。

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人血管生成素1（ANG-1）Elisa試劑盒供應(yīng)商：

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樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

樣品采集：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,， 將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月,。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的 成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右,。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS ,，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的 成份時,，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀 釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS ,，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻 漿充分,。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。
操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。