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原核注射實(shí)驗(yàn)

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原核注射

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   上海達(dá)為科生物科技有限公司,,位于上海長江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué),、醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺(tái),,能夠?yàn)閺V大客戶提供醫(yī)學(xué)科研樣本檢測(cè),、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務(wù),。

公司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室,、先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員,。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,,助理研究員(博士)4人,,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué),、轉(zhuǎn)錄組學(xué),、蛋白質(zhì)組學(xué),、代謝組學(xué),、生物化學(xué)、病理檢測(cè),、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣,。通過高度細(xì)分,、較好的服務(wù)平臺(tái),為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù),。目前,,,涉及臨床醫(yī)學(xué),、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、分子生物學(xué)等生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。

我們的目標(biāo)是為了使您的工作更輕松,、更快捷,。為了實(shí)現(xiàn)一站式服務(wù)我們不斷更新實(shí)驗(yàn)方法和引進(jìn)新的產(chǎn)品,,控制和降低各種成本,為您的研究加油,。這既是一項(xiàng)長期而艱巨的工作,,又是一項(xiàng)光榮的工作,同時(shí)也是我們企業(yè)發(fā)展的動(dòng)力源泉,。

 

 

 

 

制作動(dòng)物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測(cè) 病理學(xué)形態(tài)檢測(cè) 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測(cè) 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗(yàn)儀器設(shè)備,、玻璃儀器及器具,、一次性耗材等

一、技術(shù)定義與核心原理

原核注射是將外源DNA直接注入受精卵的雄性原核(體積較大且易定位),,使外源基因隨機(jī)整合至宿主基因組的技術(shù)。其核心機(jī)制包括:

  1. 隨機(jī)整合:外源DNA通過非同源末端連接(NHEJ)插入染色體,,整合位點(diǎn)與拷貝數(shù)不可控。

     
  2. 原核優(yōu)勢(shì):雄性原核(由精子形成)比雌性原核更易定位,,且DNA修復(fù)活性高,。

  3. 瞬時(shí)表達(dá)窗口:受精卵處于單細(xì)胞期,,DNA修復(fù)系統(tǒng)活躍,利于外源片段整合,。

生物學(xué)基礎(chǔ)
受精后12-24小時(shí)為最佳操作窗口(小鼠),,此時(shí)原核清晰可見。


二,、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程

(一)前期準(zhǔn)備

步驟關(guān)鍵操作與參數(shù)
載體構(gòu)建線性化載體(避免質(zhì)粒骨架整合) + 必需元件(啟動(dòng)子,、編碼區(qū)、polyA)
受精卵獲取超排卵處理雌鼠(PMSG/hCG)→ 與雄鼠合籠→ 取見栓后0.5天的受精卵
顯微注射系統(tǒng)校準(zhǔn)注射針內(nèi)徑1-2μm,,壓力5-10 hPa,單次注射體積2pL(含1-2ng DNA)

(二)注射與胚胎移植

  • 存活率控制:注射后受精卵存活率需>80%,。

  • 移植時(shí)機(jī):發(fā)育至2細(xì)胞期再移植,可提高著床率,。

(三)首建鼠(Founder)鑒定

  1. 基因型檢測(cè)

    • PCR法:提取鼠尾DNA,擴(kuò)增外源基因,。

    • Southern Blot:驗(yàn)證拷貝數(shù)與整合完整性,。

  2. 表達(dá)驗(yàn)證

    • Western Blot(蛋白水平)或RT-PCR(轉(zhuǎn)錄水平)。

首建鼠特性
每只Founder為獨(dú)立品系(因隨機(jī)整合位點(diǎn)不同),,需分別建系,。




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