&染色流程（以細(xì)胞培養(yǎng)物為例）

樣本預(yù)處理：

細(xì)胞爬片至半?yún)R合 → PBS 清洗 2 次 → 4% 多聚甲醛固定 10 min（室溫）,。

透化：0.5% Triton X-100 處理 5 min → PBS 沖洗。

染色：

滴加工作液覆蓋樣本,，避光孵育 30–60 min（室溫）,。

PBS 沖洗 3 次去除未結(jié)合染料。

復(fù)染與封片：

可選 DAPI 染核（5 min）→ PBS 沖洗 → 抗淬滅劑封片 → 指甲油密封蓋玻片,。

成像：

熒光顯微鏡（Ex 552 nm/Em 578 nm）觀察,，橙紅色信號對應(yīng) F-actin 分布。

試劑信息

英文名稱：Ethidium Iodide

英文名稱：5-TAMRA Phalloidin

中文名稱：5-羧基四甲基羅丹明鬼筆環(huán)肽

激發(fā)波長：555 nm

發(fā)射波長：575 nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

&5-羧基四甲基羅丹明鬼筆環(huán)肽作用機制

（一）Phalloidin的作用機制：靶向穩(wěn)定F-actin

高親和力結(jié)合：

特異性識別F-actin亞基間的溝槽,，不結(jié)合單體肌動蛋白（G-actin）,。

結(jié)合后形成1:1或1:2的穩(wěn)定復(fù)合物，親和力跨物種保守,。

肌動蛋白動力學(xué)調(diào)控：

抑制解聚：阻斷肌動蛋白亞基從纖維末端解離,，防止F-actin分解。

促進聚合：降低肌動蛋白聚合的臨界濃度（10-30倍）,，加速G-actin向F-actin轉(zhuǎn)化,。

抑制ATP水解：阻礙F-actin的ATP酶活性,，進一步穩(wěn)定纖維結(jié)構(gòu),。

生物學(xué)效應(yīng)：

破壞肌動蛋白聚合-解聚動態(tài)平衡，固定細(xì)胞骨架形態(tài),。

增強細(xì)胞機械強度,，但可能干擾細(xì)胞遷移等動態(tài)過程。

（二）5-TAMRA的作用機制：熒光標(biāo)記與檢測

光學(xué)特性：

激發(fā)/發(fā)射峰位于555/575 nm（橙紅色）,，pH不敏感,，光穩(wěn)定性強。

適用于多色熒光共定位（如與DAPI,、FITC等復(fù)染）,。

標(biāo)記原理：

5-TAMRA的羧基經(jīng)NHS活化后，與Phalloidin的氨基縮合形成酰胺鍵,。

小分子特性（直徑12-15 ?）確保標(biāo)記后仍能滲透密集肌動蛋白區(qū)域,。

復(fù)合物的協(xié)同作用機制

靶向-信號一體化：

Phalloidin將5-TAMRA錨定至F-actin，熒光信號直接反映肌動蛋白分布,。

標(biāo)記后的F-actin保留與肌動蛋白結(jié)合蛋白（如肌球蛋白）的互作能力,。

不可逆結(jié)合：

復(fù)合物與F-actin結(jié)合后無法解離，提供標(biāo)記,。

&相關(guān)試劑

iFluor594 Phalloidin

iFluor 680 Phalloidin

iFluor 555 Phalloidin

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Rhod-5N AM,Cell Permeant 鈣離子熒光探針

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