&使用方法

實驗步驟（以細(xì)胞染色為例）

固定：

用3–4%甲醛（不含甲醇）固定細(xì)胞10–30分鐘,，避免肌動蛋白結(jié)構(gòu)破壞,。

透化（可選）：

0.1% Triton X-100處理3–5分鐘，增強探針滲透性,。

染色工作液配制：

母液：30 μL DMSO溶解iFluor 405 Phalloidin粉末（1000×）,。

工作液：1 μL母液 + 1 mL PBS（含1% BSA）。

孵育與成像：

每孔（96孔板）加100 μL工作液,，避光孵育20–90分鐘,，PBS洗滌后封片觀察。

3. 應(yīng)用場景

多色成像：藍色熒光可與其他熒光染料（如綠色/紅色標(biāo)記抗體）復(fù)用,，用于高內(nèi)涵篩選（HCS）,。

神經(jīng)科學(xué)：標(biāo)記神經(jīng)元軸突中的F-actin，研究突觸可塑性,。

定量分析：結(jié)合Operetta CLS等高通量成像系統(tǒng),，量化肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)動態(tài)。

試劑信息

英文名稱：iFluor 405 Phalloidin

中文名稱：iFluor 405 鬼筆環(huán)肽

分子量： ~1400

Ex/Em：402/425 nm

溶解性：溶于DMSO

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

&核心結(jié)構(gòu)

iFluor 405 鬼筆環(huán)肽由兩部分構(gòu)成：

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin） ：一種七肽生物堿毒素,，從毒蘑菇 Amanita phalloides 中分離,。

其核心結(jié)構(gòu)為環(huán)狀七肽，含苯并噻吩環(huán),，通過氫鍵和疏水作用特異性結(jié)合F-actin亞基界面 ,。

iFluor 405熒光染料：一種深藍色熒光團，通過共價鍵偶聯(lián)至鬼筆環(huán)肽,，激發(fā)波長（Ex）402nm,，發(fā)射波長（Em）425 nm 。

2. 作用機制

特異性結(jié)合F-actin：鬼筆環(huán)肽以高親和力（Kd≈nM級）結(jié)合F-actin（聚合態(tài)肌動蛋白）的亞基界面，鎖定相鄰亞基,，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),。不結(jié)合G-actin（單體肌動蛋白）。

穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)：

降低肌動蛋白亞基解離速率,，抑制ATP水解活性,，防止微絲解聚 。

結(jié)合后不影響F-actin功能（如肌纖維收縮,、沿肌球蛋白移動）,。

物種普適性：對動植物細(xì)胞F-actin親和力一致，無種屬差異 ,。

&相關(guān)試劑

Alexa Fluor 405-Streptavidin

Alexa Fluor 647-Streptavidin

168482-84-6,，Calcein Blue AM

CalceinRed,AM鈣黃綠素紅(紅色)

SYTOX Green Nucleic Acid Stain

Lucifer Yellow CH dipotassium salt

Mag-520 Potassium Salt 鎂離子熒光探針

Rhod-2,AM,Cell Permeant 鈣離子熒光探針

Mag-520 AM,Cell Permeant 鎂離子熒光探針

Calcein Deep Red AM鈣黃綠素深紅乙酰氧基甲酯

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