【參數(shù)信息】

英文名稱：Fura-2,，AM,，CellPermeant熒光鈣探針

中文名稱：熒光鈣探針 Fura 2-AM

CAS NO：108964-32-5

分子式：C44H47N3O24

分子量：1001.85

狀態(tài)：黃色粉末

Ex/Em：505/336nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【Fura-2,，AM，CellPermeant熒光鈣探針作用機制：細胞滲透性與鈣檢測原理】

1. 細胞滲透機制（Cell Permeant特性）

AM酯化修飾的作用：

Fura-2本身因含多個羧基而帶負電荷,，無法穿透細胞膜,。AM基團通過酯化中和電荷，使其成為 脂溶性中性分子,，可被動擴散進入細胞,。

細胞內(nèi)激活：

進入細胞后，胞內(nèi)酯酶水解AM酯基,，釋放游離Fura-2,、甲醛和醋酸離子。Fura-2因重新帶電荷而被滯留在胞內(nèi),。

2. 鈣離子檢測原理

比率法（Ratiometric）檢測：

Fura-2與Ca2+結(jié)合后,，激發(fā)光譜發(fā)生位移：

結(jié)合Ca2+時，激發(fā)波長移至 340 nm,；

未結(jié)合時,，激發(fā)波長為 380 nm。

通過計算 340 nm/380 nm激發(fā)下的熒光強度比值,，可定量鈣離子濃度,，此法可消除細胞厚度,、探針濃度等干擾。

熒光變化機制：

Ca2+與Fura-2的羧基和氮原子形成配位鍵,，改變分子內(nèi)共軛結(jié)構(gòu),，導致激發(fā)光譜紅移。游離Fura-2熒光微弱,，結(jié)合Ca2+后熒光增強30倍以上,。

3. 選擇性優(yōu)勢

對Ca2+的親和力（Kd ≈ 224 nM）高于Mg2+等其他二價離子，減少交叉反應,。

比前代探針Quin-2亮度提高30倍,，光穩(wěn)定性較強。

【實驗操作流程】

1. 探針加載步驟

儲存液配制：無水DMSO溶解Fura-2 AM至1-5 mM（如：50 μg粉末+12.5 μL DMSO→4 mM）,。

工作液制備：用含鈣鎂的HBSS或HEPES-BSA緩沖液稀釋至0.5-5 μM,。關(guān)鍵提示：

添加0.02% Pluronic F-127增強水溶性。

避免血清（含酯酶）,，防止胞外水解,。

細胞孵育：

移除培養(yǎng)液,，HBSS洗滌細胞3次,。

加入工作液覆蓋細胞，37℃避光孵育15-60分鐘（依細胞類型調(diào)整）,。

水解與洗滌：移除探針液,，HBSS洗滌3次，再孵育20-30分鐘確保水解,。

【相關(guān)試劑】

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉,。