【參數(shù)信息】

英文名稱：Fluo-3 Pentasodium Salt熒光探針

中文名稱：Fluo-3五鈉鹽

分子式：C36H25Cl2Na5N2O13

分子量：879.44

激發(fā)/發(fā)射波長：506/526 nm

解離常數(shù)（Kd）：390nM (Ca2+)

激發(fā)波長：506nm

發(fā)射波長：526nm

溶解性：溶于水

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

Fluo-3 Pentasodium Salt熒光探針是一種應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究的熒光鈣離子指示劑,，通過特異性結(jié)合鈣離子后增強熒光信號，

實現(xiàn)對細胞內(nèi)游離鈣濃度的實時動態(tài)監(jiān)測,。

化學(xué)結(jié)構(gòu)

Fluo-3 Pentasodium Salt 是 Fluo-3 的鈉鹽形式,。核心結(jié)構(gòu)為 BAPT與呫噸環(huán)的衍生物，含兩個氯原子增強熒光穩(wěn)定性,。

【應(yīng)用領(lǐng)域】

細胞生物學(xué)：

實時監(jiān)測鈣信號通路,，如肌肉收縮、神經(jīng)遞質(zhì)釋放、細胞凋亡,。

案例：流式細胞術(shù)檢測血小板激活時 Ca2+瞬變,。

藥理學(xué)與藥物篩選：

高通量篩選鈣通道阻滯劑/激活劑，例如檢測藥物干預(yù)后的鈣內(nèi)流變化,。

神經(jīng)科學(xué)：

成像分析神經(jīng)元突觸傳遞中的鈣火花（需低親和力變體 Fluo-3FF 避免信號飽和）,。

【操作步驟】

（一）探針溶解與儲存

儲備液配制

用高純度水溶解粉末，參考濃度：

1mM溶液：1mg粉末溶于1.1371mL水（分子量911.7計算）,。

10mM溶液：1mg粉末溶于0.1137mL水 ,。

渦旋或超聲助溶，確保溶液澄清 ,。

儲存條件

粉末：-20℃避光干燥保存,，有效期≥1年 。

溶液：分裝后-80℃保存≤6個月,，-20℃保存≤1個月,，避免反復(fù)凍融 。

（二）細胞加載方法

Fluo-3五鈉鹽需通過物理方式導(dǎo)入細胞：

微注射（Microinjection）

將1-5μM Fluo-3溶液直接注入胞質(zhì) ,。

膜片電極（Patch Clamp）

通過電極將探針導(dǎo)入單細胞 ,。

劃痕標記（Scrape Loading）

輕刮細胞膜形成微孔，使探針滲入 ,。

關(guān)鍵提示：操作全程避光,，防止熒光淬滅 。

（三）鈣信號檢測步驟

細胞準備

加載探針后,，用緩沖液（如HHBS）洗滌3次,，去除殘留探針 。

儀器設(shè)置

激發(fā)波長：488nm（氬離子激光）,。

發(fā)射波長：525-530nm（流式FL1通道或顯微鏡綠色通道）,。

信號校準

設(shè)置未加載探針的細胞作為背景對照，扣除自發(fā)熒光,。

【相關(guān)試劑】

Rhod-2,AM,Cell Permeant

Coumarin Boronic Acid

腔腸素H,Coelenterazine H

LysoTracker Blue DND-22

BAPTA, Tetrasodium Salt

BAPTA, Tetrapotassium Salt

EGTA AM, Calcium Chelator

BAPTA AM, Calcium Chelator

TOTO 3 Far-red Fluorescent Dye

TOTO 1 Green Fluorescent Dye

TO-PRO-1 Green Fluorescent Dye

腔腸素400A, Coelenteramine 400a

CoumarinBoronicAcid(CBA)香豆su硼酸

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉,。