ELISpot Flex: Human IFN?γ (ALP)人干擾素檢測

MABTECH ELISPOT 實(shí)驗(yàn)原理

ELISPOT 實(shí)驗(yàn)使用 PVDF 膜為底的 96 孔板（cat：MSIPS 4510,，Millipore）,，包被上特異性單克隆抗體（需要無毒，不含內(nèi)毒素,，親和力高的抗體）,，以捕獲細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。

然后在培養(yǎng)板的孔內(nèi)加入待檢測的細(xì)胞和抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng),。在刺激物的刺激下,，T 細(xì)胞就會在對應(yīng)的時間段分泌對應(yīng)的細(xì)胞因子。此時細(xì)胞因子就被包被在膜上的抗體所捕獲,。

洗去細(xì)胞后,，被捕獲的細(xì)胞因子可以與biotin標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，然后用酶標(biāo)親和素與biotin結(jié)合,，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色,，就可以在膜的局部形成一個個圓形的斑點(diǎn)（當(dāng)然，也可以使用熒光素標(biāo)記的第二抗體,，這樣就省去了后續(xù)的化學(xué)顯色方法,，并且一次可以檢測多種細(xì)胞因子），每一個斑點(diǎn)就對應(yīng)了當(dāng)初一個分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞,。

統(tǒng)計(jì)膜上的斑點(diǎn)的數(shù)目,，再除以當(dāng)初加入孔內(nèi)的細(xì)胞總數(shù),，就可以計(jì)算出陽性細(xì)胞的百分比。

MABTECH該技術(shù)有以下三大優(yōu)點(diǎn)：

一：靈敏度高,。一百萬個細(xì)胞中只要有一個細(xì)胞分泌細(xì)胞因子就可被檢測出來,，相對于傳統(tǒng)的 ELISA 方法提升了 ２～３ 個數(shù)量級。

二：單細(xì)胞水平,，活細(xì)胞功能檢測,。ELISPOT 是用抗原直接刺激活細(xì)胞，檢測的是活細(xì)胞的功能,。

三：操作簡便經(jīng)濟(jì),，可進(jìn)行高通量篩選。ELISPOT 沒有復(fù)雜的細(xì)胞體外擴(kuò)增過程,，不使用同位素,，按照標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)操作，一個實(shí)驗(yàn)者可以同時處理數(shù)百個樣品,，效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它檢測方法,。

ELISpot Flex: Human IFN?γ (ALP)人干擾素檢測

MABTECH :3420-2A包括：

Capture mAb 1-D1K         1 mg/ml 600 μl

Detection mAb 7-B6-1,biotin 1 mg/ml 50 μl

Streptavidin-ALP 50μl

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