使用MEM培養(yǎng)基（推薦HAKATA貨號(hào)A19512）,；10%胎牛血清(推薦HAKATA貨號(hào)：HN-FBS-500)；2.5%馬血清,；1%雙抗（推薦HAKATA貨號(hào)：H8611）

AOLEWIS 

專(zhuān)注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā),、生產(chǎn)和服務(wù)，并提供專(zhuān)業(yè)細(xì)胞技術(shù)服務(wù)外包的技術(shù)企業(yè),。公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系,、原代細(xì)胞、胎牛血清,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、完培、輔助試劑等系列產(chǎn)品,，提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購(gòu)服務(wù),；細(xì)胞庫(kù)儲(chǔ)存細(xì)胞系1309余種，同時(shí)通過(guò)不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類(lèi),；公司還提供人源,、小鼠源細(xì)胞系的近期STR鑒定，其他種屬細(xì)胞的種屬鑒定服務(wù),，細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè),，污染檢測(cè)等細(xì)胞相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù),。公司細(xì)胞業(yè)務(wù)覆蓋國(guó)內(nèi)各大高校生物實(shí)驗(yàn)室、生物研究機(jī)構(gòu)及一些生物科研,、診斷,、制藥公司，不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),！

注意事項(xiàng)↓

懸浮細(xì)胞漂浮的處理方法

注意:瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能繼續(xù)使用,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)培養(yǎng)條件新配制的完培來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)懸浮細(xì)胞建議用未經(jīng)TC處理的培養(yǎng)瓶,。

1.收到貨發(fā)現(xiàn)有任何異?，F(xiàn)象、污染,、漏液,、細(xì)胞漂浮等，請(qǐng)拍照記錄,，并及時(shí)聯(lián)系我們銷(xiāo)售人員或技術(shù)支持;

2.用 75% 酒精擦拭瓶身,，封口膜可以不用撕去，將 T25 瓶置于培養(yǎng)箱中靜置 2~4h 后進(jìn)行操作;懸浮細(xì)胞請(qǐng)將培養(yǎng)瓶豎立在培養(yǎng)箱中靜置,。在此期間,，請(qǐng)查看說(shuō)明書(shū)以確定細(xì)胞屬性;

3. 靜置4h后，請(qǐng)將瓶?jī)?nèi)所有細(xì)胞收集至6個(gè)15ml的離心管110g(1000rpm)離心3min,將所有離心后的細(xì)胞沉淀收集到一個(gè)T25培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),，平放10分鐘,，鏡下觀察細(xì)胞密度，拍照記錄后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，第二天密度達(dá)到80%即可傳代;

4.懸浮細(xì)胞傳代方法:觀察細(xì)胞無(wú)碎片無(wú)死細(xì)胞的情況下,，建議直接加入新鮮完培直接分瓶即可。

貼壁細(xì)胞漂浮的處理方法

注意：部分細(xì)胞由于貼壁松散,，會(huì)出現(xiàn)運(yùn)輸后漂浮,，冬天氣溫低時(shí)也會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞收縮漂浮，屬于不可避免

因素,，正確處理后均可以正常生長(zhǎng),。

1 .將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，離心收集細(xì)胞(1200rpm約250g-300g離心力,，離心

3-5min)去除舊培養(yǎng)基;

2. 用PBS重懸細(xì)胞,，將所有細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心(1200rpm約250g-300g離心

力,，離心3-5min)去除PBS;

3 .加入1ml左右胰酶EDTA溶液,，0.25%重懸細(xì)胞，混勻即可，建議震動(dòng)離心管混勻,，避免吹打細(xì)

胞，放入培養(yǎng)箱消化細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞特性決定消化時(shí)間(TM3,、TM4、293 系列約1~2分鐘);

注意：部分細(xì)胞不能使用胰酶消化,，請(qǐng)注意查看細(xì)胞說(shuō)明書(shū);單顆漂浮的細(xì)胞不需要胰酶處理,。

4. 消化好后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,，使細(xì)胞團(tuán)分散,，迅速加入3-5ml含10%以上血清的培

養(yǎng)基混勻終止消化，離心(1200rpm 3min)去除胰酶;

5.加入5ml左右的細(xì)胞完培混勻,，按比例接入無(wú)菌培養(yǎng)瓶中;

6. 顯微鏡下觀察細(xì)胞是否成均勻分散的單顆細(xì)胞,，若有3-5個(gè)成團(tuán)的小細(xì)胞團(tuán)可不用重新消化，使

之貼壁后待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后再次傳代消散細(xì)胞,。

產(chǎn)品使用 僅限于科學(xué)研究,，不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。