人總補(bǔ)體(ACH50)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度,。

試劑盒組成

備注：

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：20、10,、5,、2.5,、1.25、0.625 ng/mL

2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),，可用樣本-稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。

人總補(bǔ)體(ACH50)ELISA試劑盒試劑盒性能

1.  檢測(cè)范圍：0.625 ng/mL – 20 ng/mL。

2.  靈敏度：最-低檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。

4.  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。

l  有效期：6個(gè)月

l  保存條件：2-8℃

需要而未提供的試劑和器材

1.       酶標(biāo)儀（450nm）

2.       高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.       37℃恒溫箱

4.  蒸餾水或去離子水

試劑準(zhǔn)備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?/span>1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，并得到直線(xiàn)回歸方程,，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度,。