人唾液酸酶1(NEU1)ELISA試劑盒

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人表皮生長因子受體（EGFR）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標本,、標準品、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人表皮生長因子受體（EGFR）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度,。

試劑盒組成

備注：

1.  標準品濃度依次為：20、10,、5,、2.5、1.25,、0.625 ng/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,，可用樣本-稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。

人唾液酸酶1(NEU1)ELISA試劑盒試劑盒性能

1.  檢測范圍：0.625 ng/mL – 20 ng/mL。

2.  靈敏度：最-低檢測濃度小于0.1 ng/mL,。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應,。

4.  重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。

l  有效期：6個月

l  保存條件：2-8℃

需要而未提供的試劑和器材

1.       酶標儀（450nm）

2.       高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.       37℃恒溫箱

4.  蒸餾水或去離子水

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用,。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,，標準品的濃度值為縱坐標,，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。