BL21(DE3)菌株

產(chǎn)品簡介

 BL21(DE3)菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體 T7 啟動子的表達載體(如 pET 系列)的基因。λ噬菌 體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶,，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上,，所以稱為 BL21(DE3)?？赏?時表達 T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶,，用于 pET 系列，pGEX,，pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達,。

保藏條件： -20℃保存（復溶液于 2-8℃保存）；

操作說明：

本品包含一份甘油菌,，使用本甘油菌時可以不用全融解,，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液 體培養(yǎng)即可。也可以全融解后使用,，但隨著凍融次數(shù)的增加,，細菌的活力會逐漸下降。

為保證菌種純正，避免其它細菌污染,，盡量先劃平板,，然后再挑單克隆菌落進行后續(xù)操作。

冷凍管開封：用浸過 75%酒精的脫脂棉嚴格消毒冷凍管蓋,。

菌株復溶：無菌環(huán)境中旋開裝有復溶液的滴瓶蓋,，吸取 1ml 左右復溶液，加入到冷凍管中,。輕輕振 蕩,，使凍干菌株溶解呈懸浮狀。

菌株復壯：用無菌吸管吸取菌懸液,，轉(zhuǎn)移到復溶液滴瓶中,。做好標識，在適宜溫度下培養(yǎng),。細菌 在 30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-48h,，真菌在 23-28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-72h（必要時，可適當延長培養(yǎng) 時間）,。

菌株傳代：將得到的菌株的新鮮培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到適宜的固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基中（盡量增大接種 量：如用無菌吸管吸取≥50 μL 新鮮培養(yǎng)物至固體培養(yǎng)基,，邊移動邊緩慢釋放），適宜溫度下培養(yǎng),， 用以菌株的保藏,、傳代及制備工作菌株。 注意事項： 1,、菌種活化前,，將冷凍管保存在低溫、清潔,、干燥的環(huán)境中,，長時間室溫下放置會導致菌種衰退； 2,、冷凍管開封,、凍干粉復溶,、菌株恢復培養(yǎng)等操作應在無菌條件下進行,； 3、一些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后,，延遲期較長,，部分需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長； 4,、苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)需采用含特定營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基,，敬請正確選擇，不清楚時來電詢問； 5,、某些厭氧菌的培養(yǎng),，自開封到接種完成，均需以無氧氣體充填,，以保持厭氧狀態(tài),；培養(yǎng)過程中 亦要保持厭氧狀態(tài)； 6,、某些菌種,，如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌,、淋病奈瑟菌等需要 5-10% CO2 促進生長,； 7、如發(fā)現(xiàn)冷凍管蓋松動,、復溶液渾濁等異常情況,，應停止使用對應產(chǎn)品； 8,、部分菌種有致病性,、擴散性，請專業(yè)人員在專業(yè)環(huán)境下有保護性操作,。

BL21(DE3)菌株