人真皮微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自真皮組織；真皮,，位于表皮深層,，向下與皮下組織相連，真皮結(jié)締組織的膠原纖維和彈性纖維互相交織在一起,，埋于基質(zhì)內(nèi),。其內(nèi)分布著各種結(jié)締組織細(xì)胞和大量的膠原纖維彈性纖維,，使皮膚既有彈性,，又有韌性。其由兩層組成——乳頭層與網(wǎng)狀層,。真皮的結(jié)構(gòu)組成是膠原蛋白,、彈性纖維以及基質(zhì)。微血管內(nèi)皮細(xì)胞（MEC）在炎癥反應(yīng),、腫瘤生長(zhǎng),、創(chuàng)面愈合過(guò)程中起著非常重要的作用。在創(chuàng)面愈合研究領(lǐng)域,，由于表皮細(xì)胞,、真皮成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的成熟，人們對(duì)這兩種細(xì)胞早已進(jìn)行了大量深入的研究,。與之相比,，對(duì)參與創(chuàng)面愈合過(guò)程的另一種主要細(xì)胞——真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞,，則因其體外分離培養(yǎng)技術(shù)的困難而使相關(guān)的研究受限。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、后通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

客戶收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。(該細(xì)胞傳代次數(shù)有限約 2 代，建議客戶收到細(xì)胞后盡快安排后續(xù)實(shí)驗(yàn))

1,、取出細(xì)胞瓶,，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃,，5%CO2 培養(yǎng)箱中靜置 6-8 小時(shí),，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2,、待細(xì)胞達(dá)到 80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

3、細(xì)胞傳代：

1)吸出細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基,，用 PBS 清洗細(xì)胞一次,。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養(yǎng)瓶中，37℃消化 3min 左右,；顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養(yǎng)液終止消化,。

3)用吸管輕輕吹打混勻,，按 1:2 或 1:3 等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至 5mL,，放入 37℃ 5% CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察,，每隔 2-3 天更換新鮮的培養(yǎng)基,。

COC1 人卵巢癌細(xì)胞  SCaBER(人膀胱鱗癌細(xì)胞)     RNASET2 Others Human 人 RNASET2 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液   SHH Others Human 人 SHH / Sonic hedgehog (aa 1-197) 人細(xì)胞裂解液 小鼠原代腎近端小管上皮細(xì)胞 大鼠原代嗅球神經(jīng)元細(xì)胞

胎盤(pán)堿性0酸酶(ALPP)重組蛋白 Recombinant Alkaline Phosphatase, Placental (ALPP)

HIST1H3A Protein Human 重組人 Histone H3.1 / HIST1H3A / H3FA 蛋白

KLK13重組人 KLK13 / Kallikrein-13 蛋白 Protein

HA Protein H11N2 重組甲型流感 H11N2 (A/duck/Yangzhou/906/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SEMA3A重組人 Semaphorin 3A / SEMA3A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

大鼠組織金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP4)試劑盒 ，英文名： TIMP4 ELISA Kit

Mouse ai thyroid stimulating hormone receptor aibody (Ab) ELISA Kit 小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒

MousehepatitisBviruscoreaibody,HBcAbELISAKit 小鼠乙型肝核心抗體(HBcAb)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanMaixGlaProtein,MGPELISAKit人基質(zhì)γ羧基谷蛋白

透射電鏡(TEM)制片處理包埋液A液：10毫升B液：30毫升

ELISAKitGzms-B大鼠顆粒酶B

兔素(Renin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人真皮微血管內(nèi)皮原代細(xì)胞小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heparan sulfate (HS) ELISA Kit 人類肝素(HS)試劑盒

Humanformylmethionine,fMetELISAKit 人甲酰甲硫(fMet)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickensolubleE-selectin,sE-selectin試劑盒雞可溶性E選擇素(sE-selectin)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞PDGF-B蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseferritin,FEELISAKit小鼠鐵蛋白(FE)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

phospho-eIF4E(pSer209 0.5mgphospho-eIF4E(pSer209)(phospho-Eukaryotic translation initiation factor 4E) 0酸化eIF-4E(Ser209)抗原

PVRL1重組人 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 蛋白 Protein

HEXB Protein Human 重組人 Hexosaminidase B / HEXB 蛋白

CTSA Protein Human 重組人 Cathepsin A / CTSA 蛋白