蔗糖合成酶（合成方向,；SS-Ⅱ）試劑盒說(shuō)明書

分光光度法 50 管/24 樣

蔗糖合成酶合成方向SS-Ⅱ試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫(kù)”器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶,，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解,，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其合成方向SS-Ⅱ的活性對(duì)于植物蔗糖合成具有重要意義,。

測(cè)定原理：

SS-Ⅱ催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應(yīng)生成蔗糖,，蔗糖與間苯er酚反應(yīng)可呈現(xiàn)顏色變化，在480nm 下有特征吸收峰,，酶活力大小與顏色的深淺成正比,。

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī),、移液器、1 ml 玻璃比色皿,、研缽,、冰和蒸餾水

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè),。

測(cè)定步驟：

混勻,，25℃準(zhǔn)確水浴 10min

沸水浴中煮沸 10min 左右（蓋緊，以防止水分散失）,，冷卻

混勻,，沸水浴 30min，冷卻后,， 480nm 下測(cè)定各管吸光值,。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只要做一管。每定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管,。

SS-Ⅱ活性計(jì)算

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位,。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷Cpr 2,、按照樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅱ活性(μg /min /g 鮮重) =     C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，1000μg/ml,；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03ml,； V2：加入提取液體積,，1ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml,；W：樣本鮮重，g,；T ：反應(yīng)時(shí)間：10min,。

蔗糖合成酶合成方向SS-Ⅱ試劑盒