乙醇含量測定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

乙醇含量測定試劑盒 輔酶Ⅰ

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

乙醇俗稱酒精,，是最常見的一元醇,，在檢測酒的質(zhì)量、分析血液乙醇含量和果蔬品質(zhì)判斷中通常需要頻繁,、大量地檢測乙醇含量,。

乙醇是酒的主要成分，是衡量酒質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,。我國是世界shang最早發(fā)明釀酒的國家,，也是酒類產(chǎn)品消費(fèi)大國，其消費(fèi)量居世界zhi首,。因此,，快速、準(zhǔn)確測定酒中乙醇含量,，對于確保酒的質(zhì)量和保護(hù)消費(fèi)者的健康具有重大意義,。

乙醇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最基本的抑制物，如果乙醇被大量攝入,，會(huì)不可逆抑制呼吸甚至導(dǎo)致死亡,，血液中乙醇檢測結(jié)果通常作為認(rèn)定是否酒后駕駛或醉酒駕駛的依據(jù)。

乙醇是判斷儲(chǔ)藏過程中果蔬品質(zhì)變化的重要指標(biāo),，研究表明,，適當(dāng)?shù)囊掖继幚砟軌驕p少腐爛和減輕果蔬生理病害、延緩果蔬成熟和衰老進(jìn)程,，從而延長貨架壽命,。因此,，簡便,、準(zhǔn)確和快速測定果蔬中乙醇含量具有非常重要的意義。

測定原理：

乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛,，同時(shí),，NAD 被還原生成NADH，NADH 在 1-mPMS的作用下使WST-8 顯橙黃色,，通過 450 nm 下測定吸光值變化可測得乙醇含量,。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶, -20℃保存；臨用前加入 6 ml 試劑三充分溶解待用,，用不完的試劑分裝后-20℃保存,；

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、96 孔板,、研缽、冰,、蒸餾水,。

乙醇提取：

組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 蒸餾水）,，進(jìn)行勻漿，8000g,，25℃離心 10min,，取上清待測。

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：蒸餾水體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 蒸餾水），超聲波破碎（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復(fù) 30 次）,， 8000g，25℃離心 10min,，取上清待測,。

血清（漿）等液體樣品：直接測定。

測定步驟：

酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 450nm,。

工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液

樣本測定

按下表在 96 孔板中加入如下試劑

混勻后記錄 450nm 下測定初始吸光值 A1,，和 37℃避光孵育 10min 后的吸光值A2,，計(jì)算

△A=A2-A1。

乙醇含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.0256x + 0.0055 R² = 0.9991,； x 為乙醇含量（μmol/ml）,，y 為吸光值差值△A。

按照血清（漿）體積計(jì)算

乙醇含量（μmol/ml）= (△A-0.0055)÷0.0256

=39.1×(△A-0.0055)

按照樣品質(zhì)量計(jì)算

乙醇含量（μmol/g 鮮重）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷(W ×V1÷V2）

= 39.1×(△A-0.0055)÷W

按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

乙醇含量（μmol/10⁴ cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0256×V1]÷（500×V1÷V2）

=0.078×(△A-0.0055)

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.04ml,；V2：加入提取液體積，1 ml,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml,； W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬；

注意事項(xiàng)：

測定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),，若△A﹥0.3 或乙醇含量﹥10μmol/ml,，需將樣本用蒸餾水稀釋后再測定，以確保測定的準(zhǔn)確性,。

最di檢測限：0.02μmol/ml,。

乙醇含量測定試劑盒 輔酶Ⅰ