貨號： HG-TR001

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒采用雙抗體夾心法原理,，并偶聯(lián)生物i素 - 鏈霉親和素系統(tǒng),。酶標(biāo)板微孔中包被抗胰yi蛋白酶抗體，加入樣本后孵育洗滌,，再加入生物i素化檢測抗體孵育，形成抗體- 抗原 -抗體復(fù)合物,，再次洗滌后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記鏈霉親和素（streptavidin,， SA）。經(jīng)過徹i底洗滌后加底物 TMB 顯色,，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，經(jīng)酸的終止作用轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中胰yi蛋白酶含量呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中胰yi蛋白酶濃度。

檢測范圍：0.039~2.5 ng/mL
檢  測  限：0.003ng/mL
定  量  限：0.039ng/mL
精  密  度：CV% ≤ 10%
回  收  率：80%~120%

規(guī)格：

96 T

應(yīng)用：

適用于定量檢測樣本中胰yi蛋白酶的含量,。

產(chǎn)品組成：

備注：試劑盒保存溫度為2~8℃ ,。

產(chǎn)品儲存條件與有限期：

未開封的試劑盒,， 2-8℃條件下有效期為12個月。

材料準(zhǔn)備：

（1）酶標(biāo)儀
（2）酶標(biāo)板恒溫振蕩器
（3）移液器及一次性吸頭（0.5-10µL,10 -100µL,30-300µL,100-1000µL）

（4）去離子水 

（5）吸水紙 

（6）EP 管

實驗前準(zhǔn)備準(zhǔn)備：

（1）將試劑盒平衡至室溫（18~25°C）,。
（2）20×濃縮洗滌液用純化水按1：19 體積比稀釋成洗滌工作液,。
（3）100×生物i素化檢測抗體和100×HRP-鏈霉親和素在使用前i10-15min 用稀釋液作100倍稀釋并平衡至室溫后使用。
（4）標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液稀釋至2.5ng/mL,、1.25ng/mL,、0.625ng/mL、0.3125ng/mL,、0.156ng/mL,、0.078ng/mL、0.039ng/ mL,、0ng/mL,。

操作步驟：

（1）從室溫平衡后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條加蓋封板膜后用自封袋密封放回2~8℃,。 

（2）設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品100μL，樣本孔中加入待測樣本100μL,。500μL稀釋液0（ng/mL）    

 * 當(dāng)不能夠確定待測樣品中的胰yi蛋白酶含量時,，應(yīng)當(dāng)用稀釋液做多個稀釋倍數(shù)做檢測，以免含量過高不能夠讀取有效數(shù)值,。 

（3）用封板膜封住反應(yīng)孔,， 室溫（18~25℃）下振板(500rpm)反應(yīng)60min。 

（4）棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液(300μL)，靜置30s,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次,。 

（5）標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入工作濃度的生物i素化檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，室溫（18~25℃）下振板(500rpm) 反應(yīng)60min,。

（6）棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(300μL),，靜置30s,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次,。 

（7）標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入工作濃度的HRP-鏈霉親和素100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，室溫（18~25℃）下振板(500rpm）反應(yīng)30min,。 

（8）棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(300μL),，靜置30s,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5 次,。 

（9）每孔加入單組分底物顯色液100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃靜置避光反應(yīng)10min,。 

（10）每孔加入終止液50μL，立即進(jìn)行檢測,，設(shè)定酶標(biāo)儀波長于450nm 處(建議用雙波長450nm/650nm）,。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：

實驗檢測結(jié)果：

注意事項：

（1）顯色溫度和時間對實驗結(jié)果至關(guān)重要，應(yīng)準(zhǔn)確把握,。 

（2）洗滌過程中應(yīng)使洗滌液浸泡反應(yīng)板30s 后再甩干,，以充分洗滌非特異性吸附的成分。 

（3）所有試劑使用前應(yīng)充分搖勻,，加樣時應(yīng)將所加樣物加入酶標(biāo)板孔中底部,，避免加在孔壁上部，加樣時注意不可濺出,，不可產(chǎn)生氣泡,。 

（4）若發(fā)現(xiàn)濃縮洗滌液中有結(jié)晶，可在37℃水浴鍋中孵育,，待結(jié)晶完i全溶解后再混勻稀釋至工作濃度,。 

（5）樣本中應(yīng)避免引入疊氮i化鈉(NaN3），疊氮i化鈉會破壞辣根過氧化酶活性,，使檢測值偏低,。 

（6）實驗前請先將抗體管和HRP-鏈霉親和素管1000 rpm離心30s，以避免管壁及管蓋上殘留試劑,。

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