HG-ER001 E.coli殘留總RNA檢測(cè)試劑盒
| 參考價(jià) | ￥ 15500 |
| 訂貨量 | ≥1件 |
- 公司名稱 柏萊源（天津）生物科技有限公司
- 品牌 譜新生物
- 型號(hào) HG-ER001
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/3/27 10:14:24
- 訪問(wèn)次數(shù) 85
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分子生物學(xué),、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑及耗材的銷售，包括核酸提取,、PCR產(chǎn)品,、血清、細(xì)胞培養(yǎng)耗材等產(chǎn)品,。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100 Reactions |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
E.coli 殘留總RNA檢測(cè)試劑盒
E.coli 殘留總RNA檢測(cè)試劑盒 (RT-PCR熒光探針?lè)? 說(shuō)明書(shū)
貨號(hào)：HG-ER001
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
E.coli 殘留總RNA試劑盒用于定量檢測(cè)各種生物制品中大腸桿菌總RNA的殘留情況,，輔助進(jìn)行生物制品的核酸質(zhì)控。本試劑盒使用RT-PCR熒光探針?lè)ㄔ?，將反轉(zhuǎn)錄和熒光探針qPCR檢測(cè)技術(shù)融合,，可實(shí)現(xiàn)一步法定量檢測(cè)。通過(guò)在大腸桿菌含量高,、表達(dá)穩(wěn)定的RNA靶標(biāo)上,，設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過(guò)絕對(duì)定量的方法測(cè)定總RNA殘留,。
規(guī)格：
100 Reactions
產(chǎn)品組成：
| 組分 | 管數(shù) | 體積 | 存儲(chǔ)條件 |
|---|---|---|---|
| One Step RT-qPCR buffer | 1 | 1mL | -20℃ |
| One Step Enzyme Mix | 1 | 100μL | -20℃ |
| E.coli RNA Primer& Probe Mix | 1 | 370μL | -20℃ |
| E.coli RNA定量標(biāo)準(zhǔn)品（2ng/μL） | 1 | 25μL | -20℃ |
| RNA IPC Primer&Probe Mix | 1 | 370μL | -20℃ |
| ROX High | 1 | 50μL | -20℃ |
| ROX Low | 1 | 50μL | -20℃ |
| RNA稀釋液 | 2 | 1mL | -20℃ |
產(chǎn)品儲(chǔ)存條件與有限期：
所有試劑都于-20℃避光保存與運(yùn)輸,，有效期18個(gè)月
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、 樣品前處理（需使用試劑盒：HG-CL300）
1.樣品中大腸桿菌（E.coli）RNA殘留檢測(cè)作為殘留類的檢測(cè)項(xiàng)目,，檢測(cè)前需要去除供試品中的DNA,，因此需要對(duì)供試品進(jìn)行樣本前處理。可選擇使用我司配套的樣本前處理試劑盒,，處理方式如下 ：
| 組分名稱 | 單反應(yīng)用量（μL） |
|---|---|
| DNase I | 1 |
| 10X Reaction Buffer with MgCl2 | 2 |
| RNase Inhibitor | 0.5 |
| 無(wú)酶去離子水 | 12.5 |
| 供試品 | 4 |
2. 按照上表方式配置供試品 DNaseI 消化液,，震蕩混勻，離心 5s,；
3. 將配置完成的供試品 DNaseI 消化液置于 37℃恒溫水浴鍋中孵育 60min,；
4. 取出孵育后供試品 DNaseI 消化液，瞬時(shí)離心 5s 后置于 65℃干式恒溫器中孵育 10min 滅活 DNase I 酶,，將滅活后的供試品DNaseI 消化液放置于 2-8℃冰箱暫存,。
二、 qPCR操作步驟
1.定量參考品及NTC制備
1.1 將試劑盒中的大腸桿菌RNA定量標(biāo)準(zhǔn)品和RNA稀釋液置于冰上,，待完i全融化后,，輕微振蕩混勻，短暫離心將液體甩至管底,；
1.2 取6支干凈的1.5mL離心管,，分別標(biāo)記為ST0，ST1,，ST2,，ST3，ST4,，ST5,；
1.3按下表進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的梯度稀釋，每次稀釋確保充分混勻后再進(jìn)行下一個(gè)梯度的稀釋,。（表格中的體積僅供參考,，可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需求等比例擴(kuò)大）；
| 稀釋管 | 稀釋體積 | 濃度(fg/μL) |
| ST0 | 5 μL定量參考品+ 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+05 |
| ST1 | 5 μL ST0 + 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+04 |
| ST2 | 5 μL ST1 + 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+03 |
| ST3 | 5 μL ST2 + 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+02 |
| ST4 | 5 μL ST3 + 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+01 |
| ST5 | 5 μL ST4 + 45 μL RNA稀釋液 | 2.00E+00 |
1.4 NTC 的制備：100uL RNA 稀釋液,。
2.RT-qPCR反應(yīng)液的制備和加樣
2.1 從冰箱里取出各試劑置于冰上解凍,；
2.2 PCR反應(yīng)液配制：詳見(jiàn)表5，One Step RT-qPCR buffer,、One Step Enzyme Mix、E.coli RNA Primer& Probe Mix,、ROX,，這4種試劑可提前預(yù)混成Mix, 再依次加入5μL標(biāo)曲 (ST1/ST2/ST3/ST4/ST5)、NTC,、供試品溶液,，混勻。每個(gè)樣各做三個(gè)平行,。
2.3 根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次所需的Mix混合液總量：
Mix混合液 =（反應(yīng)孔數(shù)+2）× (10+1+3.6+0.4) μL（含有2孔的損失量）
加樣完成密封好管子后,，請(qǐng)先低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底，再震蕩混勻5 sec以上，完i全混勻反應(yīng)液,，再低速離心10 sec將管壁的液體離心收集至管底,，如有氣泡，需將氣泡排盡,。
| 組分 | 單孔反應(yīng)(μL) | 備注 |
| One Step RT-qPCR buffer | 10 | 可以提前預(yù)混Mix,每孔加 15μL mix再對(duì)應(yīng)加5μL標(biāo)曲/ NTC/樣品 |
| One Step Enzyme Mix | 1 | |
| E.coli RNA Primer&Probe Mix | 3.6 | |
| ROX | 0.4 | |
| 標(biāo)曲/NTC/樣品 | 5 | |
| 總體積 | 20 |
RT-qPCR反應(yīng)液配制表
*請(qǐng)對(duì)應(yīng)機(jī)型選擇適配的ROX,；若機(jī)型適配為no ROX，請(qǐng)加入等體積的去離子水（要求無(wú)核酸及核酸酶污染級(jí)去離子水）,。
3. IPC組配制反應(yīng)液的制備和加樣（如果在檢測(cè)中已經(jīng)有如加標(biāo)回收等方式,，IPC檢測(cè)可以取消）每次實(shí)驗(yàn)需做一個(gè)無(wú)模板對(duì)照（IPC-NTC）和各個(gè)待測(cè)樣本的IPC（IPC-S）檢測(cè)，根據(jù)下表：
| 組分 | 單孔反應(yīng)(μL) | 備注 |
| One Step RT-qPCR buffer | 10 | 可以提前預(yù)混Mix,，每孔加 15μL mix 再對(duì)應(yīng)加5μL IPC-樣 品 / IPC-NTC |
| One Step Enzyme Mix | 1 | |
| RNA IPC Primer&Probe Mix | 3.6 | |
| ROX | 0.4 | |
| IPC-NTC / IPC-樣品 | 5 | |
| 總體積 | 20 |
IPC RT-qPCR反應(yīng)液配制表
備注：
加標(biāo)體系ERC：90μL 樣品+10μL ST3,；
加標(biāo)回收率=ERC/（0.9*樣品+0.1*ST3）；（加標(biāo)回收率質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：50%~150%）
加標(biāo)回收與IPC二選一,，如選擇加標(biāo)回收,，可將表7中IPC-S更換為ERC-S。
4.反應(yīng)孔排版示例
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A | ST1 | ST1 | ST1 | S1 | S1 | S1 | ||||||
| B | ST2 | ST2 | ST2 | S2 | S2 | S2 | ||||||
| C | ST3 | ST3 | ST3 | S3 | S3 | S3 | ||||||
| D | ST4 | ST4 | ST4 | |||||||||
| E | ST5 | ST5 | ST5 | |||||||||
| F | IPC-S1 | IPC-S1 | IPC-S1 | |||||||||
| G | NTC | NTC | NTC | IPC-S2 | IPC-S2 | IPC-S2 | ||||||
| H | IPC-NTC | IPC-NTC | IPC-NTC | IPC-S3 | IPC-S3 | IPC-S3 |
備注：該示例表示的是檢測(cè)5個(gè)濃度梯度的RNA標(biāo)準(zhǔn)曲線,、1個(gè)無(wú)模板對(duì)照NTC,、3個(gè)待測(cè)樣本。針對(duì)IPC的無(wú)模板對(duì)照（IPC-NTC）和待測(cè)樣本的 IPC（IPC-S1,，IPC-S2,，IPC-S3）。每個(gè)檢測(cè)做3個(gè)重復(fù)孔,。實(shí)際檢測(cè)時(shí)可根據(jù)樣本多少,，參照上表示例進(jìn)行96孔板排版加樣。
加樣完成后將96孔板用光學(xué)膜封閉,，輕微震蕩混勻,，用96孔板專用離心機(jī)短暫離心將液體全部甩至管底后放入qPCR儀中。
三,、 反應(yīng)程序和參數(shù)設(shè)置
（以ABI公司7500 qPCR儀,，軟件版本V2.0.6為例）
1.創(chuàng)建空白新程序，選擇絕對(duì)定量檢測(cè)模板,，taqman探針?lè)ā?br/>2.創(chuàng)建新檢測(cè)探針,，命名為E.coli RNA，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為FAM,，猝滅熒光基團(tuán)為none,；創(chuàng)建新檢測(cè)探針，命名為RNA IPC,，選擇報(bào)告熒光基團(tuán)為VIC,，猝滅熒光基團(tuán)為none；檢測(cè)參比熒光為 ROX。
3.設(shè)置三步法反應(yīng)程序如下表：反應(yīng)體積 20μL,。
| 循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 15min | 1 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 30 sec | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10sec | 45 |
| 退火/延伸(收集熒光) | 60℃ | 40 sec |
反應(yīng)程序
4. 運(yùn)行PCR程序,。
四、 結(jié)果分析
1. 在Results 的Amplification Plot 中,，可初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常,。機(jī)器通常會(huì)自動(dòng)設(shè)置閾值（Threshold ）和基線（Baseline），當(dāng)target設(shè)置等不同時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)多個(gè)閾值,，而導(dǎo)致結(jié)果分析有誤,，此時(shí)請(qǐng)手動(dòng)設(shè)置閾值線，但需確保設(shè)置的閾值線在指數(shù)擴(kuò)增區(qū),，如通常Threshold設(shè)置為0.15,，選Auto Baseline，點(diǎn)擊Analyze,，可看到調(diào)整后的結(jié)果,。
2. 在Results的Standard Curve 中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（Slope）,、截距（Intercept）,、R2。 可接受標(biāo)準(zhǔn)Effective：85%~110%,，R2≥0.98,；
3. 在Results 的Report中，Mean Quantity 一欄可讀取無(wú)模板對(duì)照 NTC,、待測(cè)樣本的檢測(cè)值,，單位為fg/μL。NTC的Ct值應(yīng)大于ST5的Ct值,，檢測(cè)值應(yīng)低2fg/μL,。
4. 分析IPC的Ct值，正常情況下樣本的Ct-IPC值應(yīng)該與無(wú)模板對(duì)照NTC的Ct-IPC值一致或±2,。如樣本的Ct-IPC值與無(wú)模板對(duì)照NTC的Ct-IPC值相比明顯增大,，則表明樣本可能存在明顯抑制。
5. E.coli RNA 殘留量計(jì)算：
異常數(shù)據(jù)及檢測(cè)過(guò)程出現(xiàn)意外情況比如管漏液,，樣本蒸發(fā)以及樣本加錯(cuò)等,，其產(chǎn)生的數(shù)據(jù)應(yīng)刪除，并在檢測(cè)記錄中說(shuō)明原因,，其他正常的數(shù)據(jù)可以繼續(xù)應(yīng)用于檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算中
注意事項(xiàng)：
1. 本試劑盒已通過(guò)穩(wěn)定性（凍融等因素）的驗(yàn)證，無(wú)需分裝,。
2. 陰性樣品和陽(yáng)性樣品（參考品和待測(cè)樣品等）的配制環(huán)境需區(qū)分區(qū)域,，不可在一個(gè)區(qū)域內(nèi)操作，配制人員需穿戴整齊，戴
好口罩,、手套和穿好潔凈服,。
3. 注意在不同加樣步驟間及時(shí)更換吸頭，避免交叉污染,，避免長(zhǎng)時(shí)開(kāi)蓋,。
4. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用。
5. 試劑盒內(nèi)所有組分建議在低溫環(huán)境融化后使用,。
6. 只有嚴(yán)格遵守說(shuō)明書(shū)的操作方法,，全部使用本試劑盒配套的試劑才能保證優(yōu)良檢測(cè)效果。
7. 盡量在當(dāng)天完成樣本前處理純化后立即進(jìn)行后續(xù)qPCR檢測(cè),，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
8. 最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),。
9. 公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，
預(yù)留充足的樣本,。
10. 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷,。
E.coli殘留總RNA檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品訂購(gòu),，請(qǐng)聯(lián)系柏萊源（天津）生物科技有限公司！
柏萊源（天津）生物科技有限公司的優(yōu)勢(shì)：
現(xiàn)貨供應(yīng)：公司庫(kù)存充足,，可快速發(fā)貨,，減少用戶等待時(shí)間。
效期保障：嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量,，確保試劑效期新鮮,，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
專業(yè)技術(shù)支持：提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案和技術(shù)指導(dǎo),，幫助用戶優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,，提高實(shí)驗(yàn)成功率。
定制化服務(wù)：根據(jù)用戶需求,，提供個(gè)性化的產(chǎn)品和服務(wù)解決方案,。
售后保障：完善的售后服務(wù)體系，及時(shí)解決用戶在使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題,。
E.coli殘留總RNA檢測(cè)試劑盒：柏萊源（天津）生物科技有限公司,，更多產(chǎn)品資訊，請(qǐng)聯(lián)系我們哦,！
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