產(chǎn)品簡介：

魚病毒性神經(jīng)壞死病又稱為病毒性腦病和視網(wǎng)膜病，是一種嚴重危害魚類魚苗的病毒性疾病,。病原為病毒性神經(jīng)壞死病毒（Viral nervous necrosis virus, VNNV）,屬乙型野田村病毒屬成員[1],。其臨床癥狀為一系列與神經(jīng)有關(guān)的異常表現(xiàn)。魚苗具不正常的螺旋狀或旋轉(zhuǎn)式游動或靜止時腹部朝上,，一旦用手觸碰病魚,，病魚會立即游動等現(xiàn)象，魚體體色異常蒼白,。不同種類的魚臨床癥狀不同,，有的魚苗會出現(xiàn)鰾過度膨脹，有的病魚厭食,、消瘦等,。發(fā)病嚴重的魚苗伴隨著極-高的死亡率。

本試劑盒適用于檢測的魚的腦,、眼等標本中魚類神經(jīng)壞死病毒 RNA,，適用于魚類神經(jīng)壞死病毒感染的輔助診斷,。

產(chǎn)品特點：

一、嚴格的質(zhì)控體系

所有試劑盒從原料到成品都經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制,，確保每一盒試劑盒都具有穩(wěn)定可靠的質(zhì)量,，讓您的檢測結(jié)果更可信。

二,、高靈敏度

產(chǎn)品經(jīng)過不斷優(yōu)化,，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的魚類神經(jīng)壞死病毒核酸,，不放過任何潛在的感染風(fēng)險,。

三、便捷操作

綜合各項指標特性,，研發(fā)出操作便捷的試劑盒,。從樣本制備到結(jié)果分析，每一步都有清晰的操作指南,，即使是新手也能輕松上手,。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經(jīng)過多種樣本的檢測驗證,，適用于魚的腦,、眼等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求,。

五,、個性化定制服務(wù)

專業(yè)的研發(fā)團隊可為您提供個性化的定制服務(wù)，根據(jù)您的特殊需求進行產(chǎn)品優(yōu)化和調(diào)整,，為您提供更貼合實際的檢測方案,。

六、豐富的產(chǎn)品線

除了魚類神經(jīng)壞死病毒(VNN)熒光PCR檢測試劑盒,，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒,，滿足您在不同領(lǐng)域的檢測需求。

七,、完善的售前售后服務(wù)

我們擁有完善專業(yè)的售前售后服務(wù)團隊,，在您購買前為您提供詳細的產(chǎn)品咨詢和技術(shù)支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題,，讓您無后顧之憂,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒，可滿足一定規(guī)模的檢測需求,。

檢測方法

實時熒光PCR,，具有快速、準確、靈敏等優(yōu)點,。

適用儀器

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列

熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

取魚類的腦和眼,，魚苗和較小的仔魚取整條魚,。

保存和運輸

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月,，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融,。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,，手術(shù)-剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。

1.2RNA 提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA-提取試劑盒（離心柱提取法）,，

請按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑VNN 反應(yīng)液酶液

用量20μL1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,，21uL/管。

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA,、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,，蓋好管蓋，混勻,，短暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道,、樣品信息,，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,，選擇 None 即可。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟循環(huán)數(shù)溫度時間收集熒光信號

11 cycle42℃20min否

21 cycle95℃10min否

340 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤ 38,，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性,，否則為陰性,；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足,，否則實驗視為無效,。

7.檢測方法的局限性

7.1樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理,、運送以及保存質(zhì)量有關(guān),；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,；

7.3陽性對照,、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果,；

7.4病原體在流行過程中基因突變,、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果,；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異,，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

7.6試劑運輸,，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果；

7.7本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段,。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行,；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完-全混勻并短暫離心,；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理,。

9.本產(chǎn)品僅供科研,。

選擇我們的魚類神經(jīng)壞死病毒(VNN)熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！