產(chǎn)品描述

本試劑盒基于分子排阻色譜原理（SEC法），通過(guò)分子大小差異實(shí)現(xiàn)外泌體分離,，具有操作簡(jiǎn)便,、高純度和高回收率的優(yōu)點(diǎn)，特別適用于大體積樣本的外泌體分離,。分離的外泌體可用于 WB 分析,、NTA 或納米流式粒徑分析、電鏡檢測(cè),、組學(xué)研究及細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的功能研究,。本試劑盒常用于細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液等大體積樣本,，也適用于血清,、血漿等樣本。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

常溫運(yùn)輸,。組分A在4℃保存,，組分B常溫保存，有效期12個(gè)月,。

使用方法

自備儀器,、試劑與耗材：高速冷凍離心機(jī)、離心管,、超濾管（MWCO：50 kDa）,、PBS（現(xiàn)配現(xiàn)用，0.2um 過(guò)濾,，超聲或真空脫氣）,、20%乙醇（現(xiàn)配現(xiàn)用，0.2um 過(guò)濾,，超聲或真空脫氣）,、純化柱固定器(自行購(gòu)買或者合適的固定試管鐵架臺(tái)，以避免操作過(guò)程中發(fā)生晃動(dòng))

1.    樣品預(yù)處理

(1）       去除細(xì)胞：將樣品在 4℃,、300g 離心 5 min,，轉(zhuǎn)移上清至新離心管；無(wú)細(xì)胞樣本可跳過(guò)此步驟,。

(2）       去除細(xì)胞及碎片：4℃,、2,000g 離心 10 min，轉(zhuǎn)移上清至新離心管,。

(3）       去除大體積顆粒：步驟 (2)得到的上清,，在 4℃、14,000g 下離心 30 min,，轉(zhuǎn)移上清至新離心管,。

2.    純化柱預(yù)處理

(1)   將外泌體純化柱（Exosome Purification Column(10mL)）安裝在純化柱固定器上,，下方放置廢液槽。讓純化柱在室溫（18-25℃）平衡至少 30 min,；溫度過(guò)低或過(guò)高會(huì)影響分離效果,。

(2)   檢查純化柱下端是否充滿液體,，如無(wú)空氣可跳過(guò)此步驟,；若有空氣，將純化柱倒置,，打開(kāi)下端密封帽,，用移液器或注射器注入水或 20% 乙醇頂出空氣，使密封帽中充滿液體后重新蓋上,，并放回固定器,。

(3)   打開(kāi)純化柱頂蓋，再打開(kāi)下端密封帽,，棄去封柱液（可倒掉或用移液器吸出）,，將純化柱適配器（Column Adapter (10 mL)）連接到純化柱，從頂部加入 2 倍柱體積（20 mL）PBS 進(jìn)行平衡,，至下端無(wú)溶液流出,。清洗過(guò)程中確保頂部篩板始終保持濕潤(rùn)。完成后,，蓋上底端密封帽,，斷開(kāi)適配器，并加入 1 mL PBS 備用,。

注：

①    每次操作前應(yīng)先打開(kāi)純化柱上蓋,，再打開(kāi)下端密封帽，以避免空氣進(jìn)入,，影響分離效果,。

②    分離過(guò)程中確保純化柱頂部篩板始終濕潤(rùn)，以保持最佳分離效果,。

③    向純化柱中加入大體積溶液時(shí),，可將適配器連接到純化柱，將溶液加入到適配器中,。

④    PBS 建議新鮮配制并通過(guò) 0.2 μm 濾膜過(guò)濾,，或使用商業(yè)的無(wú)菌 PBS 以防微生物或顆粒污染。PBS使用前必須平衡至室溫,，以避免純化柱中出現(xiàn)氣泡影響分離效果,。

3.    分離外泌體

(1)   樣品上樣：移除純化柱中的 PBS，在上方加入 1 mL 樣本,；如樣本不足 1 mL,，可用 PBS 補(bǔ)至 1 mL,，混勻后上樣。取下純化柱底部密封帽,，待樣本全部進(jìn)入純化柱后再加 PBS,。

注：

①    如樣本體積超過(guò) 1 mL，建議用 50 kDa 超濾管將樣本濃縮至 1 mL,，濃縮倍數(shù)不超過(guò) 20 倍（具體操作見(jiàn)超濾管使用說(shuō)明書(shū)）,。

②    對(duì)于高粘度樣本（如血漿、血清,、高粘度胸腹水等）,，可取 0.5 mL 樣本用 PBS 稀釋至 1 mL，混勻后上樣,。

③    待樣品進(jìn)入篩板后再加入 PBS,，以避免樣品被稀釋影響分離效果。

(2)   外泌體分離：在純化柱下方放置 1.5 mL 離心管,，向上方加入 0.5 mL PBS,，待下方收集到 0.5 mL 餾分后，繼續(xù)加入 0.5 mL PBS,，并更換新的 1.5 mL 離心管收集,。按流出順序標(biāo)記各餾分管編號(hào)。

(3)   外泌體收集：收集 4,、5,、6、7,、8 號(hào)餾分管以獲得外泌體,，其中 5、6,、7 號(hào)餾分管的外泌體濃度更高,。可直接對(duì)收集液測(cè)定外泌體顆粒數(shù)和蛋白濃度,。

(4)   外泌體濃縮：測(cè)定外泌體顆粒濃度和蛋白濃度后,，根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)需求，可選擇是否進(jìn)行濃縮,。如需濃縮,，建議使用 MWCO 50 kDa 的超濾管，在 4,000g 離心至所需體積即可,。

4.    純化柱維護(hù)

(1)   收集所有餾分后,，將適配器連接至純化柱，從頂部加入至少 2 倍柱體積（20 mL）PBS清洗純化柱,，至下方無(wú)溶液流出,。

(2)   繼續(xù)加入 1.5 倍柱體積（15 mL）20% 乙醇清洗,，至下方無(wú)溶液流出。

(3)   最后,，取下適配器,，向純化柱中加入 3 mL 20% 乙醇封閉液，安裝純化柱頂蓋,，并在密封帽中填滿 20% 乙醇,，蓋到純化柱下端出口，于 4℃直立保存,。

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。

2． 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

3． 新購(gòu)買或使用后的純化柱,，上篩板和白色瓊脂糖微球之間可能會(huì)出現(xiàn)一定的空隙，這是儲(chǔ)存和使用過(guò)程中凝膠沉降造成的,，并不影響純化柱的性能,，將上篩板向下推至無(wú)空隙即可正常使用。

4． 本試劑盒常用于細(xì)胞培養(yǎng)上清,、尿液等大體積樣本,，也適用于血清、血漿等樣本,。其他微量珍貴樣本,，請(qǐng)向本公司技術(shù)人員咨詢。

5． 純化柱保存在封閉液中,，封閉液為 20%乙醇,。20%乙醇建議現(xiàn)配現(xiàn)用，同時(shí)經(jīng) 0.2um 濾膜過(guò)濾,、超聲或真空脫氣,，避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡，影響分離效果,。

6． 每次純化柱使用前需要使用無(wú)菌并平衡至室溫的 PBS 清洗,。PBS建議現(xiàn)配現(xiàn)用，同時(shí)經(jīng) 0.2um 濾膜過(guò)濾,、超聲或真空脫氣,，避免造成純化柱出現(xiàn)大量氣泡，影響分離效果,。

7． 純化柱中間不能有氣泡,，使用前后需認(rèn)真檢查,，避免影響實(shí)驗(yàn)。

8． 純化柱可以反復(fù)利用,，但是多次使用會(huì)影響效果,，建議重復(fù)使用不超過(guò)5次。

9． 當(dāng)分離的外泌體進(jìn)行 NGS 或者其他組學(xué)分析時(shí),，為避免交叉污染,，建議每個(gè)樣品使用一支新的純化柱。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。