細胞計數(shù)儀是一種快速簡便的自動化細胞數(shù)量和活率測量裝置，目前主要通過基于顯微圖像的圖像識別法和基于阻抗的電阻抗計數(shù)法,。

基于顯微圖像的圖像識別法,，通常通過臺盼藍染色或AO/PI等熒光染料染色，整合先進的光學(xué)成像技術(shù)和智能圖像識別技術(shù),，進行自動細胞計數(shù)檢測,。臺盼藍是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性,，以檢測細胞是否存活,。活細胞的細胞膜完整,，能排斥臺盼藍,，不會被染成藍色；而死細胞由于細胞膜破損或不完整,，會被臺盼藍染成藍色,，因此可借助臺盼藍染色進行細胞計數(shù)，區(qū)分死活細胞,。吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）是可以與細胞核內(nèi)雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料,。

AO可以自由穿透細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核中發(fā)出綠色熒光,；PI只能通過破損的細胞膜,，即死細胞的細胞膜,，嵌入死細胞的細胞核中發(fā)出紅色熒光。當(dāng)兩種染料同時存在于死細胞核中時,，會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,，從而導(dǎo)致死細胞發(fā)出紅色熒光。因此可通過AO/PI準確區(qū)分死活細胞,，進行準確細胞計數(shù),。

細胞計數(shù)儀計量校準以下校準項目應(yīng)在細胞計數(shù)儀經(jīng)過開機預(yù)熱、儀器達到正常工作條件后進行,，校準前應(yīng)當(dāng)確保儀器工作狀態(tài)正常,，參照附錄 A 進行校準原始數(shù)據(jù)記錄。

1 外觀要求用目視并配合手動操作進行檢查,。儀器外表應(yīng)光滑平整,，不應(yīng)有影響工作性能的機械損傷；顯示屏表面應(yīng)平整潔凈無劃痕,，讀數(shù)清晰,；開關(guān)及按鍵功能良好。儀器應(yīng)有以下標識：名稱,、型號,、編號、生產(chǎn)廠家,、出廠日期,。

2 測試前準備開啟儀器，參照儀器使用說明書,，使儀器達到最佳工作條件,。根據(jù)客戶使用要求、被校準儀器的日常工作模式和選取的標準物質(zhì)類型選取合適的細胞測量模式,。

3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀釋液,、純水或蒸餾水進行上樣計數(shù)，測量 4 次,，記錄測量值并取其中的最高值作為空白值,。

4 示值誤差儀器的示值誤差以細胞濃度（總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度）標準物質(zhì),、細胞活率標準物質(zhì),、顆粒直徑標準物質(zhì)測量值與標準值的誤差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度,、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì),，使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù)，測量 5 次,，記錄測量值,，并按照公式（1）進行示值誤差計算。CiCs（1）式中：—細胞計數(shù)器示值誤差,，/mL,、%或 μm； Ci—5 次測量值的平值,，/mL,、%或 μmCs—標準值，/mL,、%或 μm,。

5 測量重復(fù)性儀器重復(fù)性以細胞濃度（總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度）標準物質(zhì),、細胞活率標準物質(zhì),、顆粒直徑標準物質(zhì) 10 次測量值的實驗標準偏差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度,、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì),，使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù),，測量 10 次,，記錄測量值，并按照公式

（1）進行示值誤差計算,。1( )21nC CSTDnii i

（2）式中：STD-測量值的標準偏差,，/mL、%或 μm,； n—測量次數(shù)； JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次測量值,，/mL,、%或 μm； Ci —測量平均值,，/mL,、%或 μm。8 校準結(jié)果表達經(jīng)校準后的細胞計數(shù)儀應(yīng)填發(fā)校準證書,，校準證書應(yīng)符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求,，參照附錄 C 給出校準項目名稱、測量值以及擴展不確定度,。9 復(fù)校時間間隔送校單位可根據(jù)實際情況自主決定細胞計數(shù)儀的復(fù)校時間間隔,，建議不超過1 年。

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計量校準、驗證與確認的優(yōu)勢是專注做生物制藥質(zhì)控服務(wù),，針對一些特殊的儀器都非常熟悉,，核心團隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規(guī)都很熟悉,，比如：我們團隊專門研發(fā)了替代進口的熒光定量PCR儀校準裝置,，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準的成本（遠低于同行）；我們開發(fā)了細胞計數(shù)儀的校準內(nèi)部規(guī)程,；開發(fā)了細胞復(fù)蘇儀的內(nèi)部校準規(guī)程,；開發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準規(guī)程；我們開發(fā)了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭,，降低用戶大量使用探頭時的成本,，代替了進口；這些例子還有很多,，因為我們都是生物出身,，所以我們關(guān)注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設(shè)備上面專注,，“與質(zhì)量同行,、做儀器設(shè)備質(zhì)控”，為了讓生物制藥更安全而努力,。

我們在服務(wù)上與其它單位密切合作,，包括強檢、特檢或做不了的都幫客戶代送代取,，省時,、省力、方便客戶,。

澤恒.華譜是專注于為生物制藥行業(yè)提供實驗室儀器計量校準,、儀器設(shè)備驗證與驗證/廠房驗證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程部/驗證部/生產(chǎn)部的質(zhì)控外包服務(wù),。