兔核孔蛋白188kda(NUP188)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒技術(shù)流程

ELISA試劑盒需自備的設(shè)備及試劑  

1. 450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)

2. 單道或多道微量加液器及吸頭

3. 稀釋樣品的EP管

4. 蒸餾水或去離子水

5. 吸水紙

6. 盛放洗液的容器

性能:
1．準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900。
2．靈敏度：檢測(cè)濃度小于10 pg/ml,。
3．特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng),。
4．重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。

ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)：
1,、高效、靈敏,、特異的抗體,；
2、重復(fù)性和可靠性高,；
3,、吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高的固相載體,；
4,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型,；
5,、可檢測(cè)指標(biāo)齊全：細(xì)胞因子檢測(cè)、心肌梗塞檢測(cè),、內(nèi)分泌檢測(cè),、肝纖維化檢測(cè)、自身免疫檢測(cè),、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè),、傳染病檢測(cè)、特種蛋白檢測(cè),、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)等等,；
6、質(zhì)量保證,，限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,，其濃度為2000pg/mL,。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度,， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。

3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋,。

注意事項(xiàng)劑盒的儲(chǔ)存及有效期

1. 未開(kāi)封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存,。請(qǐng)注意，收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液,，終止液保存于4℃,，其他試劑保存于-20℃,。

2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,，開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,，避免潮濕。

須知：

試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用,；使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn),，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的,。

ELISA試劑盒報(bào)

1、ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線,；

2,、詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟；

3,、完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（試劑耗材,，實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)果說(shuō)明）,；

[樣本處理及要求]

1.  血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3.  組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果）,，稱(chēng)重后將碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè),。

4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注：標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標(biāo)儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

ELISA檢測(cè)試劑盒承諾

公司長(zhǎng)期與各大高校,、醫(yī)院及科研單位保持著良好的合作關(guān)系,，公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)態(tài)度得到了他們的一致認(rèn)可。篤瑪生物本著客戶(hù)至上的原則為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,，公司承諾產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問(wèn)題免費(fèi)包退換（非人為因素造成的）,。公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，并且承諾收到樣本七個(gè)工作日出結(jié)果,，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性

兔核孔蛋白188kda(NUP188)ELISA試劑盒

試驗(yàn)原理：
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系,。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）,；

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物,；

（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中）,，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；

（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液,；

（6）洗滌液,，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水,；

（7）酶反應(yīng)終止液,，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的*終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L,。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法
1,、擬和曲線：
輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400
輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值,，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕,，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類(lèi)型”中選擇“xy散點(diǎn)圖”;在“子圖表類(lèi)型”中選擇“折線散點(diǎn)圖”，按“下一步”;選擇“系列產(chǎn)生在行”,，按“下一步”;數(shù)據(jù)標(biāo)志,，可以填寫(xiě)：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸,，濃度;按下一步,，點(diǎn)擊完成?？傻们€圖,。
單擊曲線，按右鍵,，選擇“添加趨勢(shì)線”,，在類(lèi)型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中,，選擇顯示公式,，選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值,。
也可以用上面說(shuō)的方法： 雙擊圖表,，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線,。

2,、計(jì)算濃度：
第一次實(shí)驗(yàn)：
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例，已知OD值,，計(jì)算濃度,。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0

特別說(shuō)明:
#.一周內(nèi)使用可存于4℃,，需長(zhǎng)時(shí)間存放或多次使用建議存于-20℃.
化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL,，37°C孵育90分鐘
2.倒去孔內(nèi)液體，拍干,，加入100μL化抗體工作液,，37°C孵育 60分鐘
3.洗滌3次
4.加入 100μL酶結(jié)合物工作液，37°C孵育 30分鐘
5.洗滌5次
6.加入100μL 發(fā)光底物混合液，37°C孵育5分鐘左右
7.立即測(cè)定各孔的化學(xué)發(fā)光值
8.結(jié)果計(jì)算

ELISA試劑盒優(yōu)勢(shì)：

1,、抗體----高效,、靈敏、特異性好

2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,、吸附性好、空白值低,、孔底透明度高

3,、優(yōu)化方案----重復(fù)性高，可靠性強(qiáng)

4,、高標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)要求：靈敏度高,，特異性強(qiáng)

5、適用范圍廣：血漿,、血清,、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類(lèi)型的樣本

ELISA試劑盒操作步驟：
1.使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8.取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

服務(wù)承諾：

一,、產(chǎn)品品質(zhì)保障（打造高品質(zhì)產(chǎn)品,，若產(chǎn)品質(zhì)量存在任何問(wèn)題，公司一律包退包換,，質(zhì)量有保障,，解除了客戶(hù)的后顧之憂）

二、提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)（我司擁有專(zhuān)業(yè)酶免技術(shù)的工作人員為客戶(hù)提供來(lái)樣檢測(cè)服務(wù),限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性）

三,、提供全程技術(shù)指導(dǎo)（專(zhuān)業(yè)的科順技術(shù)人員進(jìn)行指導(dǎo)）

四,、全天在線服務(wù)（如果您在使用ELISA試劑盒產(chǎn)品時(shí)有任何的疑問(wèn)，或者對(duì)我們有任何意見(jiàn)建議,，您都可以通過(guò)來(lái)電或咨詢(xún),。）

[說(shuō)明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn),。

2.最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性,、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份,。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,，網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考,。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品,。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果,。

5.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,，預(yù)留充足的樣本。

6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差,。

7.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,，因該類(lèi)樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài),、細(xì)胞數(shù)量,、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況,。

8.某些天然蛋白或重組蛋白,，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,，而不被檢測(cè)出,。

ELISA檢測(cè)試劑盒承諾

公司長(zhǎng)期與各大高校、醫(yī)院及科研單位保持著良好的合作關(guān)系,，公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)態(tài)度得到了他們的一致認(rèn)可,。篤瑪生物本著客戶(hù)至上的原則為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，公司承諾產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問(wèn)題免費(fèi)包退換（非人為因素造成的）,。公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),，并且承諾收到樣本七個(gè)工作日出結(jié)果，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。