咖啡酸ELISA檢測試劑盒

樣品活化方法
生物樣品中的通常以無活性的形式存在,，在檢測指標活性前必須進行活化處理,。
活化方法如下：
血清、血漿： 280 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,，混勻,，加入40 μL活化試劑1,，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2,，混勻后立即檢測,。
注意：樣品被稀釋了10倍！
細胞培養(yǎng)上清：20 μL標準品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品,，混勻,，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘,。再加入40 μL活化試劑2,，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了2倍,！
組織勻漿：1960 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品,，混勻后檢測。
注意：樣品被稀釋了50倍,！
 
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次,。板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。

操作步驟
1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外,。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 
8. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
 
試驗所需自備物品
1. 酶標儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱,，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙

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