2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個月

微孔板,，酶標(biāo)儀

血清血漿/全血/組織

微孔板,，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀
2.離心機

1.雙蒸水

1.一次性手套
2.吸頭

1.血液中的GSH幾乎全部存在于紅細胞內(nèi)，可以用每升全血中GSH的克數(shù)來表示,，也可用每克Hb中GSH含量來表示；
2.計算時應(yīng)用消光系數(shù),，故比色計要校正波長,。用標(biāo)準(zhǔn)管計算較方便、準(zhǔn)確,；
3.吸取上清時,，用帶刻度的5ml滴管，或者移液器,，避開表面的一層薄膜,，插到上清液中吸取2ml做顯色反應(yīng),；
4.每批實驗做2個標(biāo)準(zhǔn)管、空白管,，以減少操作誤差,；

試劑工作液配制 ：
1. 試劑A為過飽和溶液，如有結(jié)晶,，則取上清使用,；

2. GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液：
溶劑儲備液：雙蒸水=1：9稀釋，即為GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

3. 1mmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：GSH分子量為307，每次測定前將3.07 mg的GSH標(biāo)準(zhǔn)品加到10mlGSH的溶劑工作液中,，混勻,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 20μmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:取1mmol/LGSH標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2ml加GSH標(biāo)準(zhǔn)溶劑工作液9.8ml,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

樣本的前處理：
1. 培養(yǎng)細胞：將收集好的細胞，用PBS清洗1~2次,，低速離心收集沉淀細胞,，再加入0.3-0.5ml 0.1M pH7.4的等滲PBS緩沖液重懸細胞，超聲或手動研磨破碎細胞后待測,；
上清液制備：
取破碎后的細胞懸液0.1ml,加0.1ml試劑A混勻,，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液1ml待測,；

2. 血清（漿）：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻,，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測,；

3. 全血樣本的處理：1:9溶血液的制備：取0.1ml肝素抗凝全血加雙蒸水0.9ml,，充分混勻，直至透亮為止,；
上清液制備：取0.05ml,加試劑A0. 2ml混勻,，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘， 取上清液待測,；

4. 組織樣本：10%勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱取組織重量,，按重量（g）：體積（ml）=1:9比例加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿,，2500轉(zhuǎn)/分,，離心10min，取上清液待測；
上清液制備：取0.1ml,加0. 1ml試劑A 0. 1ml混勻,，3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,， 取上清液待測；


計算：

（1）全血計算公式：
全血中GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x 樣本前處理 x 樣本測定前
（umol/L） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）稀釋倍數(shù)（10倍）

（2）細胞及組織計算公式：

GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x樣本前處理 ÷ 待測勻漿蛋白
（umol/gprot） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（2倍） 濃度（gprot/L）

（3）血清（漿計算公式）

GSH含量 = 測定OD值 – 空白OD值 x 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 x樣本前處理
（umol/L） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （20umol/L） 稀釋倍數(shù)（5倍）