近些年,，以干細胞治療為基礎(chǔ)的再生醫(yī)學(xué)逐漸發(fā)展起來,。間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell, MSC）作為干細胞的一種，正受到科學(xué)家的關(guān)注,。

間充質(zhì)干細胞（MSC）是一類存在于多種組織（如骨髓,、臍帶、胎盤,、脂肪等）,，具有自我更新能力和多向分化潛力的成體干細胞。具有易獲取,、低免疫原性,、低致瘤性、良好增殖率等多個特點,，因在免疫調(diào)節(jié)和組織再生上的巨大潛力而受到更多的關(guān)注,。

Duc M Hoang教授2022年發(fā)表了一篇綜述[1],，對間充質(zhì)干細胞（MSC）在各系統(tǒng)疾病治療領(lǐng)域的臨床研究成果進行了系統(tǒng)性的總結(jié),，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肺功能障礙,、代謝/內(nèi)分泌相關(guān)疾病,、生殖障礙、皮膚燒傷和心血管疾病等,。文中提到,，在臨床試驗中，MSC治療是安全的,，不過仍需要進行大規(guī)模的臨床試驗,。MSC來源特異性的疾病治療也是研究者關(guān)注的一個方向。

截止2023年8月底,，我國已有近70種MSC藥物獲得藥物臨床試驗申請（IND）受理（數(shù)據(jù)來源于國家藥品評審中心）,，涉及較多的適應(yīng)癥，包括膝骨關(guān)節(jié)炎,、間質(zhì)性肺病,、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫綜合征。

圖1：MSC來源及分化（來源：DOI:10.1080/17474124.2018.1393332）

在間充質(zhì)干細胞的研究中,，細胞的鑒定是很重要的一個環(huán)節(jié),。

自1991年MSC的概念提出后，科學(xué)家們使用不同的分離培養(yǎng)方法,，用不同的標志物來研究MSC,，沒有形成統(tǒng)一的鑒定標準，增加了MSC研究的難度,。因此,，國際細胞治療協(xié)會（ISCT）在2006年定義了MSC的低標準[2],，是目前被廣泛接受的一種鑒定方法， 如Table1所示：

接下來小編為您展示下層浪LongCyte™流式細胞儀檢測MSC表面標志物的數(shù)據(jù),。

實驗方案：

圖2：MSC表面標志物配色方案

染色步驟：

Part. 1 取傳代培養(yǎng)的人臍帶間充質(zhì)干細胞（h UCMSCs）,，胰酶消化收集細胞，加入PBS調(diào)整細胞濃度為10 x106 cells/ mL,；

Part. 2 取7個流式管,，每管分別加100ul細胞懸液，空白管不加抗體,，其余的管按照抗體使用說明書分別加入相應(yīng)熒光抗體CD90-FITC,、CD105-PE、CD73-APC,、CD45-PE-Cy7,、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700,，混勻,，室溫避光孵育30 min；

Part. 3 加2mlPBS,，1500r,，離心5 min，棄上清液,，加入300ulPBS重懸細胞,；

Part. 4 上流式細胞儀，檢測細胞表面標志物的表達,。

數(shù)據(jù)展示：

圖3：MSC表面標志物檢測（A：主細胞群,；B-G：分別是陽性指標CD73、CD105,、CD90和陰性指標HLA-DR,、CD34、CD45的百分比）

圈門邏輯：

01  通過FSC-H/SSC-H設(shè)門,，排除碎片,，圈出主細胞;

02  建立直方圖，橫坐標分別選擇CD73,、CD105,、CD90、HLA-DR,、CD34,、CD45；

03  在儀器軟件上選擇圖層編輯功能，與空白管對應(yīng)指標的直方圖進行疊加,，得到每個指標的百分比,。

總結(jié):

1.層浪LongCyte™流式細胞儀軟件操作簡單，可直接獲得峰形疊加圖,，進行歸一化和平滑處理,，對流式圖進行美化處理；

2.有批量操作功能,，可批量自動上樣,，批量分析數(shù)據(jù)，批量導(dǎo)出流式圖,，節(jié)約整體實驗時間,。

 層浪臨床型LongCyte™3光14色流式細胞儀可滿足多種熒光染料同時使用，歡迎大家使用層浪流式細胞儀,，共同探索更多的多色流式檢測方案,。 

  圖4：層浪生物L(fēng)ongCyte™3光14色流式細胞儀

參考文獻：

（1）Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.
Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.

（2）Dominici, M，Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.

（3）F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.

（4）Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.