2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存,。

6個月

微孔板,，酶標(biāo)儀

血清、血漿,、尿液,、細(xì)胞、組織

微孔板,，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀//

1.蒸餾水
2.PBS 緩沖液
3.生理鹽水
4.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭

1.試劑盒僅科研使用,；
2.樣品含量如超出檢測范圍上，可用生理鹽水稀釋后檢測,，檢測結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),；
3.試劑中含有防腐劑和穩(wěn)定劑，可能存在一定的刺激作用或毒性,，請勿直接接觸皮膚,、眼睛,。一旦接觸，即用大量清水沖洗,。請勿吞服,；
4.試劑防止葡萄糖、等試劑的污染,；
5.試劑與樣本的用量可按比例改變,；

樣品處理
血清、血漿樣本：
從待測樣本中分理出的血清或血漿不應(yīng)有溶血,，直接檢測,，如超過線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測,；

培養(yǎng)液樣本：
吸取培養(yǎng)液,，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘,，取上清測定,；（一般建議細(xì)胞密度在106/ml以上）

細(xì)胞樣本：
1. 取適量的細(xì)胞(一般推薦>106/ml以上)，1000轉(zhuǎn)/分,，離心10分鐘,，棄上清，留細(xì)胞沉淀,。
2. 用0.1mol/L,、pH7~7.4 PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000轉(zhuǎn)/分,，離心10分鐘,，棄上清，留細(xì)胞沉淀,。
3. 加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿,，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W,，每次3~5s,，間隔30s，重復(fù)3~5次,。亦可手動勻漿,，制備好的勻漿液不可離心，待用,。也可用裂解液裂解（TrintonX-100,，1-2%,裂解30-40分鐘），裂解好的液體不可離心,，待用,。
【注】：
? 破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎,。

組織樣本：
準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：體積(ml)=1：9的比例,，加入9倍體積的勻漿介質(zhì),，冰浴條件下手動或機械勻漿。2500轉(zhuǎn)/分,，離心10分鐘,，取上清待用。
【注】：
? 如組織樣本不是高脂肪樣本,，勻漿介質(zhì)一般用PBS或生理鹽水,；
? 如組織樣本為高脂肪樣本或部分高脂樣本，勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用無水乙醇,。

測定方法：
酶標(biāo)儀TC測定操作:
1,、 按下表依次加入試劑：
2、 充分混勻, 37℃水浴中孵育10分鐘,。
3,、 酶標(biāo)儀測定510nm吸光度,。以空白孔調(diào)零,，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔和各待測孔的吸光度。

全自動上機操作
計算：
血清,、血漿等液體樣本：
（1）酶標(biāo)儀比色
TC(mmol/L)=｛(樣本孔吸光度-空白孔吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度-空白孔吸光度)｝×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）

（2）
TC(mmol/L)=（樣本管吸光度/校準(zhǔn)管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）

細(xì)胞,、組織等樣本：
（1）酶標(biāo)儀比色
TC(mmol/gprot)=｛(樣本孔吸光度-空白孔吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度-空白孔吸光度)｝×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）÷待測樣本濃度(gprot/L)

（2）
TC(mmol/gprot)= （樣本管吸光度/校準(zhǔn)管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）
÷待測樣本濃度(gprot/L)