2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存,。

6個(gè)月

微孔板,，酶標(biāo)儀

液體，細(xì)胞,，組織

微孔板,，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀
2.恒溫水浴鍋
3.離心機(jī)
4.移液器

1.純水
2.蛋白定量試劑盒

1.96孔板
2.吸頭
3.一次性手套

1.試劑盒中的低溫試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降,；
2.組織勻漿液（5X）久置或低溫保存,，容易產(chǎn)生乳白色渾濁；如果白色渾濁不明顯,，可以直接使用,，不影響效果；如果白色渾濁較多,，應(yīng)棄用,；
3.待測(cè)樣品如不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)置于2-8℃保存,，3天內(nèi)穩(wěn)定,；
4.如果樣品濃度過高，應(yīng)用純水稀釋后重新檢測(cè),，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),；
5.檢測(cè)緩沖液現(xiàn)配現(xiàn)用；配好后用不完可4℃避光保存,。如果出現(xiàn)出現(xiàn)白色粘稠物,，不可使用，需重新配置,；

試劑配制
1. 組織勻漿液的稀釋：
按組分 B：純水=1：4的比例稀釋,，獲得1X的組織勻漿液；
2. MPA工作液配制：
取一支1.5gMPA粉末,，充分溶解于50ml的組分D中,；4℃保存3~4天有效。
【注】：
3. 檢測(cè)緩沖液的配制：
取一瓶2.5g試劑E鉬酸銨粉末,，充分溶解于50ml 純水中,，也可根據(jù)使用情況稱取一定量的鉬酸銨加水按比例溶解即可，4℃避光保存,。(現(xiàn)配現(xiàn)用)
注意：鉬酸銨溶于水會(huì)逐漸變化成乳白色濁液,，則不能使用。
4. 標(biāo)準(zhǔn)的配制：
取干凈離心管或試管,，按下表進(jìn)行操作,，依次稀釋：

樣本處理
1. 液體樣本：直接加樣檢測(cè)
2. 組織/細(xì)胞樣本
取待測(cè)材料，清洗擦干，準(zhǔn)確稱量5g,，加入研磨器內(nèi),，再加入少量的1x組織勻漿液，研磨碎,，留取上清,，再次用1x組織勻漿液研磨，并倒入50ml離心管,，補(bǔ)充1x組織勻漿液至45ml，充分混勻,，4000g離心5min,，取0.5ml上清液，加入等量純水,，即為待測(cè)樣品,；

操作步驟：
的加樣：
按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管,、樣品管,，溶液應(yīng)按順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡,。
如果樣品中的的含量過高,，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。
【注】：
? 樣品的檢測(cè)能設(shè)置2平行管,，求平均值,。

操作表：
立即混勻,，30℃水浴15min室，以空白調(diào)零,，760nm，測(cè)各管吸光度值,。
計(jì)算：
以系列標(biāo)準(zhǔn)（25,、50、75,、100,、125、150,、200,、250ug/ml）為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
以樣品管的吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得含量。

100g樣品中含量（mg）= （C0 x V1）X100/（m1 x 1000）
= （C0 x V1）/（m1 x 10）

【注】：
1. C0為根據(jù)待測(cè)樣品的吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的的濃度（ug/ml）；
2. V1為待測(cè)樣品的總體積（ml）,；
3. m1為樣品的質(zhì)量（g）,；
4. 1000：ug換成成mg