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成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)
- 公司名稱 伊萊博生物科技(上海)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時(shí)間 2024/6/17 11:43:48
- 訪問次數(shù) 392
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1. C57小鼠,,8-10周,,通過頸椎脫位處死,浸入75%乙醇浸泡5分鐘,,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中,。
2. 使用ykj和nz,使髖關(guān)節(jié)脫臼,,保持股骨頭完整,。
3. 用zxq去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中,。
4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,,將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。
5. 用ykj將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,,加入3ml預(yù)熱的Collagenase D(1.5mg/ml),。
6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化,,時(shí)間2h ,。
7. 第一次消化結(jié)束后,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,,40um的細(xì)胞篩過濾后,,離心1500rpm,2min,。
8. 沉淀用DMEMwq培養(yǎng)基重懸,,計(jì)數(shù),種植在24孔板中,。
9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,,放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化,,時(shí)間2h,,然后收集細(xì)胞,。