成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)

來源：伊萊博生物科技（上海）有限公司 2024年03月19日 13:28

1. C57小鼠，8-10周,，通過頸椎脫位處死,，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中,。

2. 使用眼科剪和鑷子,，使髖關(guān)節(jié)脫臼，保持股骨頭完整,。

3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽,，將組織放入含2%雙抗的PBS中。

4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,，將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中,。

5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，加入3ml預(yù)熱的Collagenase D（1.5mg/ml）,。

6. 放入37℃,、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化，時(shí)間2h ,。

7. 第一次消化結(jié)束后,，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，40um的細(xì)胞篩過濾后,，離心1500rpm,，2min。

8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸,，計(jì)數(shù),，種植在24孔板中。

9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,，放入37℃,、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化，時(shí)間2h,，然后收集細(xì)胞,。

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