92-01-348 NK細(xì)胞分選試劑盒
- 公司名稱 蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 92-01-348
- 產(chǎn)地 蘇州
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時間 2025/3/6 13:30:04
- 訪問次數(shù) 1049
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實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,儀器,生物反應(yīng)器,發(fā)酵罐,不銹鋼生物反應(yīng)器,實(shí)驗(yàn)耗材,純水機(jī),離心機(jī),顯微鏡,電子天平
產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) |
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NK細(xì)胞分選試劑盒可用于從小鼠脾臟單細(xì)胞懸液中分離未經(jīng)標(biāo)記的NK 細(xì)胞,。非NK細(xì)胞(T細(xì)胞,、DC 細(xì)胞、B細(xì)胞,、粒細(xì)胞,、巨噬細(xì)胞、紅系細(xì)胞)被生物素化的抗體和識別生物素的磁珠標(biāo)記通過去除這些非NK細(xì)胞,,從而得到高純度的NK細(xì)胞,。
其分選原理為:用生物素結(jié)合的單克隆抗體混合物(作為一級標(biāo)記試劑)和與磁珠結(jié)合的抗生物素單克隆抗體(作為二級標(biāo)記試劑)對非靶細(xì)胞進(jìn)行間接磁性標(biāo)記。磁性標(biāo)記的非目標(biāo)細(xì)胞在分選器的磁場中被保留在分選柱中,,而未標(biāo)記的NK 細(xì)胞則通過分選柱流出,。
試劑和儀器要求
緩沖液(pH7.2 PBS,0.5% BSA,、2mM EDTA,, 2~8℃)
分選柱和分選器。
(可選)熒光偶聯(lián)的抗體用于流式分析,。
(可選)PI或7-AAD可以用于流式分析中排除死細(xì)胞,。
(可選)死細(xì)胞清除試劑盒用于死細(xì)胞的清除。
(可選)預(yù)分離過濾器去除細(xì)胞團(tuán)塊,。
操作步驟
一,、樣本準(zhǔn)備
使用手動方法或組織解離器制備脾臟單細(xì)胞懸液。
二,、磁珠標(biāo)記
1.細(xì)胞計數(shù),。
2.300xg離心10分鐘。去除上清,。
3.每107個細(xì)胞總量使用 40μL緩沖液重懸,。
4.每107個細(xì)胞總量添加 10μLNK細(xì)胞生物素抗體混合物,。
5.混勻,,2-8℃孵育 5分鐘。
6.每107個細(xì)胞加入 2mL緩沖液洗滌細(xì)胞,,300xg離心10分鐘,,去上清,。
7.每107個細(xì)胞添加 80μL 緩沖液。
8.每107個細(xì)胞添加 20μL抗生物素磁珠,。
9.混勻,,2-8℃孵育 10分鐘。
10.(可選)添加染色抗體,。
11.進(jìn)行細(xì)胞分選步驟,。
三、細(xì)胞分選
xM或xL分選柱進(jìn)行細(xì)胞分選
1.將分選柱置于相對應(yīng)的分選器中,。
2.用適當(dāng)體積的緩沖液潤洗分選柱(xM: 500 μL,; xL: 3mL)
3.將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至分選柱中。收集含有未標(biāo)記細(xì)胞的流出液,,即 NK細(xì)胞,。
4.加適量的緩沖液,收集總流出物,,并與步驟 3中的流出液混合,,這是NK細(xì)胞。( xM: 500 μL,;xL: 3mL)
5.(可選 )將分選柱從分選器中取出,,并將其放在合適的收集管上。加適量的緩沖液到分選柱中,,迅速用塞子推下,,得到就是磁性標(biāo)記的非NK細(xì)胞。( xM: 1mL,;xL: 5mL)
儲存溫度
2-8℃避光保存,,請勿冷凍,。有效期見試劑外標(biāo)簽,。
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