柱式動物組織/ 細胞總蛋白抽提試劑盒

產(chǎn)品描述

本試劑盒創(chuàng)新性地采用過柱純化的方法,，能夠快速,、溫和、高效地裂解動物組織或細胞,，有效提取總蛋白,，包括離心管柱和經(jīng)過優(yōu)化的細胞裂解液。與傳統(tǒng)的RIPA裂解液相比，本試劑盒可以提取出更多的蛋白,，避免在細胞裂解過程中由于DNA沉淀和不溶性細胞碎片導致的部分蛋白丟失,。采用過柱純化技術，最小可處理20 μL樣本與裂解液混合物,，最大可達500 μL,。提供變性和非變性兩種細胞裂解液，用戶可根據(jù)后續(xù)的實驗需求選取不同的裂解液,。

【注】：變性裂解液可用于SDS-PAGE,，Western-blotting， ELISA 分析,；非變性裂解液可用于IP,，Co-IP，enzyme assays 等分析,。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存

常溫運輸,。組分A、B在4℃保存,，組分C,、D常溫保存，有效期12個月,?！咀ⅰ浚貉心グ艨芍貜褪褂谩５蜏叵伦冃粤呀庖簳霈F(xiàn)成分析出,，緩至室溫或水浴鍋溫浴即可,。

使用方法

細胞樣品

一、 樣品裂解

變性液提取

1.       去除細胞培養(yǎng)液,，用預冷的PBS 洗滌兩次,。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL,?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細胞裂解不充分，影響蛋白提取的質量,。

2.       用槍吹打數(shù)下,，轉移裂解液至離心管柱中?！咀ⅰ浚荷倭繘]有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質量,。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min。

4.       收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液,?！咀ⅰ浚杭毎呀庖褐胁缓鞍酌敢种苿?，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.       去除細胞培養(yǎng)液,，用預冷的 PBS 洗滌兩次,。按照6孔板每孔加入150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液，如果細胞密度過高可增加裂解液的量至250-300uL,?！咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細胞裂解不充分，影響蛋白提取的質量,。

2.       用槍吹打數(shù)下,，冰上放置10min后轉移裂解液至離心管柱中,。

3.       14,000 rpm 室溫離心1 min,。

4.       收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液?！咀ⅰ浚杭毎呀庖褐胁缓鞍酌敢种苿?，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

二,、懸浮細胞

變性液提取

1.         收集細胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL離心管中,，1mL預冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3min,，棄上清,，重復三次。

2.         根據(jù)細胞沉淀體積加入同體積的預冷PBS重懸細胞后,，根據(jù)細胞量加入對應量的變性裂解液,。【注】：表中為推薦用量,；PBS不可多加,，只要能使細胞重懸即可。

3.         劇烈震蕩15s后,，轉移裂解液于離心管柱中,。【注】：少量沒有裂解的細胞不影響最終蛋白提取的質量,。                   

4.         14,000 rpm 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）,。

5.         收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液?！咀ⅰ浚杭毎呀庖褐胁缓鞍酌敢种苿?，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解。

非變性液提取

1.         收集細胞 0.5~2x10⁷ 于1.5mL離心管中,，1mL 預冷的 PBS 洗滌兩次,，1,000xg 離心 3min ,，棄上清，重復三次,。

2.         根據(jù)細胞量加入對應量的非變性裂解液,。【注】：表中為推薦用量,。

3.         劇烈震蕩15s后,，冰上孵育10min。

4.         轉移裂解液于離心管柱中,。

5.         14,000 rpm 室溫離心1min

6.         收集離心管底的裂解液即為細胞全蛋白提取液,。【注】：細胞裂解液中不含蛋白酶抑制劑,，需要用戶加入蛋白酶抑制劑防止蛋白降解,。

三、組織樣品

變性液提取

1.         把組織剪切成小碎片,。

2.         加入適當裂解液,，一般100mg 組織加入1mL 裂解液?！咀ⅰ浚喝绻呀獠怀浞挚蛇m當增加裂解液,。

3.         用組織勻漿器或研磨棒在1.5mL離心管中研磨組織，直至充分裂解,?！咀ⅰ浚喝绻切募。つw等不易研磨的組織應使用勻漿器勻漿,。

4.         轉移裂解液于離心管柱中,。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min（如果裂解液過于粘稠可增加離心時間）。

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液,?！咀ⅰ浚喝绻M織樣品非常小，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解,。

非變性液提取

1.         組織剪切成小碎片,。

2.         加入適當裂解液，一般100mg 組織加入1ml 裂解液,?！咀ⅰ浚喝绻呀獠怀浞挚蛇m當增加裂解液。

3.         用組織勻漿器或研磨棒研磨組織,，直至充分裂解,。冰上放置10min?！咀ⅰ浚喝绻切募?，皮膚等不易研磨的組織應使用勻漿器勻漿,。

4.         轉移裂解液于離心管柱中。

5.         14,000 rmp 室溫離心1min,。

6.         收集離心管底的裂解液即為全蛋白提取液,。【注】：如果組織樣品非常小,，可剪切后直接加入裂解液并劇烈vortex裂解,。

注意事項

1.    本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領域,。

2.    本產(chǎn)品不含蛋白酶抑制劑，使用中應加入蛋白酶抑制劑混合物(100×, 不含EDTA)(貨號: AP02L084) 防止蛋白降解,。

3.    本產(chǎn)品不兼容Bradford法測蛋白濃度,，請使用 BCA蛋白定量試劑盒（貨號： AP12L025）。

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