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BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)方法及注意事項(xiàng)
BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)方法：
1. 試管檢測(cè)方法(樣品:BCA工作液=1:20)
(1) 各取100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中。
(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液,，混勻,。根據(jù)待測(cè)樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度。
標(biāo)準(zhǔn)孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測(cè)范圍：20-2000 μg/mL)
增強(qiáng)孵育方法：60℃ 孵育30 min(檢測(cè)范圍：5-250 μg/mL)
【注】：BCA 檢測(cè)蛋白濃度,，延長(zhǎng)孵育時(shí)間會(huì)加深顏色反應(yīng),。升高溫度會(huì)加快顯色反應(yīng),，但是溫度升高和時(shí)間延長(zhǎng)會(huì)降低檢測(cè)下限,，以及降低工作線(xiàn)性范圍,。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間,。
(3) 冷卻到室溫,。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)定波長(zhǎng)為 562 nm,，在10 min內(nèi)對(duì)所有樣品讀數(shù),。【注】：由于BCA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn),，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會(huì)繼續(xù),。但是，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)?，因此若?0 min 內(nèi)能對(duì)所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測(cè)試,，不會(huì)導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。
(4) 根據(jù)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù)),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(X-蛋白濃度μg/mL,；Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
2. 微孔板檢測(cè)方法(樣品: BCA工作液=1:20)
(1) 各取10 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中,。【注】：樣品與工作液比例為1:20,，檢測(cè)范圍為125-2000 μg/mL,。若樣品濃度非常低，可使用25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)(即1:8),，這時(shí)試劑盒的檢測(cè)范圍為 20-2000 μg/mL,。
(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液，槍頭吹打充分混勻,。蓋上微孔板,，37℃ 孵育30 min。
(3) 冷卻到室溫,，在酶標(biāo)儀上的562 nm 波長(zhǎng)范圍處檢測(cè)吸光度,。
(4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)( X-蛋白濃度μg/mL,；Y-最終的OD 562nm),。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
BCA蛋白定量試劑盒注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。
若測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)無(wú)梯度變化,，表明存在BCA法檢測(cè)干擾物,，詳細(xì)的BCA法干擾物質(zhì)兼容性表詳見(jiàn)官*,。
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