手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)方法及注意事項(xiàng)
BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)方法：
1. 試管檢測(cè)方法(樣品:BCA工作液=1:20)
(1) 各取100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到反應(yīng)管中,。
(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液，混勻,。根據(jù)待測(cè)樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度,。
標(biāo)準(zhǔn)孵育方法：37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測(cè)范圍：20-2000 μg/mL)
增強(qiáng)孵育方法：60℃ 孵育30 min(檢測(cè)范圍：5-250 μg/mL)
【注】：BCA 檢測(cè)蛋白濃度，延長孵育時(shí)間會(huì)加深顏色反應(yīng),。升高溫度會(huì)加快顯色反應(yīng),，但是溫度升高和時(shí)間延長會(huì)降低檢測(cè)下限，以及降低工作線性范圍,。若蛋白濃度很低,，可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長孵育時(shí)間。
(3) 冷卻到室溫,。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測(cè),，設(shè)定波長為 562 nm，在10 min內(nèi)對(duì)所有樣品讀數(shù),?！咀ⅰ浚河捎贐CA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn)，即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會(huì)繼續(xù),。但是,，由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)停虼巳羰?0 min 內(nèi)能對(duì)所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測(cè)試,，不會(huì)導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤,。
(4) 根據(jù)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(X-蛋白濃度μg/mL,；Y-最終的OD 562nm),。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
2. 微孔板檢測(cè)方法(樣品: BCA工作液=1:20)
(1) 各取10 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品加入到微孔板中?！咀ⅰ浚簶悠放c工作液比例為1:20,，檢測(cè)范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低,，可使用25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)(即1:8),，這時(shí)試劑盒的檢測(cè)范圍為 20-2000 μg/mL。
(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液,，槍頭吹打充分混勻,。蓋上微孔板，37℃ 孵育30 min,。
(3) 冷卻到室溫,，在酶標(biāo)儀上的562 nm 波長范圍處檢測(cè)吸光度。
(4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線( X-蛋白濃度μg/mL,；Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度,。
BCA蛋白定量試劑盒注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。
若測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)無梯度變化，表明存在BCA法檢測(cè)干擾物,，詳細(xì)的BCA法干擾物質(zhì)兼容性表詳見官*,。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品,，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品,，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體,、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任,。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心